[发明专利]一种磷脂酶D突变体及其应用

权利要求书

1.一种磷脂酶D突变体，其特征在于，基于SEQ ID No.２所示的磷脂酶D氨基酸序列，进行如下突变：Asn209Ile；或Asn209Ile，Asp256Thr；或Asn209Ile，Gln388Cys；或Asn209Ile，Asp519Val；或Asn209Ile，Asp256Thr，Gln388Cys；或Asn209Ile，Asp256Thr，Asp519Val；或Asn209Ile，Gln388Cys，Asp519Val；或Asn209Ile，Asp256Thr，Gln388Cys，Asp519Val。

2.权利要求1所述磷脂酶D突变体的编码基因。

3.权利要求1所述磷脂酶D突变体或权利要求2所述的基因的用途，其特征在于，用于磷脂酸和磷脂酰丝氨酸的制备。

4.一种包含权利要求2所述的基因的重组载体或重组菌，其特征在于，表达载体为pBSA43，宿主细胞为枯草芽孢杆菌WB600；或者，表达载体为pPIC 9K，宿主细胞为毕赤酵母GS115；或者，表达载体为pPIC9K-Flo，宿主细胞为毕赤酵母GS115。

5.权利要求1所述磷脂酶D突变体的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将权利要求2所述的基因进行酶切，与载体连接得到了新的重组载体；

（2）将重组载体转化入宿主细胞中，得到重组菌株，之后将重组菌株发酵，得到高活力磷脂酶D；

表达载体为pBSA43，宿主细胞为枯草芽孢杆菌WB600；或者，表达载体为pPIC 9K，宿主细胞为毕赤酵母GS115；或者，表达载体为pPIC9K-Flo，宿主细胞为毕赤酵母GS115。