[发明专利]OLA和MQCA免疫亲和柱及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 201910514467.0 | 申请日： | 2019-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN110196321A | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 谢洁;龚晓云;翟睿;黄泽建;刘梅英;曾伟杰;江游;戴新华;方向 | 申请（专利权）人： | 中国计量科学研究院 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531;G01N30/06;B01D15/26;B01D15/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 100029 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 偶联 免疫亲和柱 固相介质 单克隆抗体 活化 制备 高效净化 类化合物 目标物 溶胀 位点 回收率 应用 封闭 检测 | ||
1.一种OLA和MQCA免疫亲和柱，其特征在于，包括位于上部的偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和位于下部的偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，二者以筛板隔开；所述固相介质为CNBr活化的Sepharose 4B。
2.根据权利要求1所述的OLA和MQCA免疫亲和柱，其特征在于，所述免疫亲和柱中装填的所述偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质的厚度均为50mm。
3.一种OLA和MQCA免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)基质制备：取适量溴化氰活化的琼脂糖干粉Sepharose 4B用1mM盐酸使其溶胀，抽滤，使用1mM HCl洗涤；
(2)偶联：使用偶联缓冲液(0.1mol/L NaHCO3,0.5mol/L NaCl,pH 8.4)洗涤步骤1)溶涨后的经CNBr活化的Sepharose 4B；洗涤后，迅速将CNBr活化的Sepharose 4B分别转移到含有适量OLA单克隆抗体的偶联缓冲液中及MQCA单克隆抗体的偶联缓冲液中；混匀，柔和震荡反应；
用所述偶联缓冲液分别洗去未偶联的OLA单克隆抗体、MQCA单克隆抗体，分别得到琼脂糖-OLA单抗偶联复合物和琼脂糖-MQCA单抗偶联复合物；
(3)封闭活性基团：将所得琼脂糖-OLA单抗偶联复合物和琼脂糖-MQCA单抗偶联复合物分别转入0.1M Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)中，封闭所有残留的活性基团；
(4)洗涤：依次用0.1mol/L醋酸-醋酸钠，pH 4.0内含0.5mol/L NaCl的缓冲液和0.1mol/L Tris-HCl，pH 8.0内含0.5mol/L NaCl的缓冲液分别洗涤步骤(3)所得琼脂糖-OLA单抗偶联复合物和琼脂糖-MQCA单抗偶联复合物；以除去偶联后未偶联上的多余的配体；洗涤后用用200mL PBS充分平衡，分别制得偶联有OLA单克隆抗体的固相介质和偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，待用；
(5)装柱：下层装填偶联有MQCA单克隆抗体的固相介质，上层装填偶联有OLA单克隆抗体的固相介质。
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