[发明专利]一种基于索烃化的蛋白质偶联方法

权利要求书

1.一种基于索烃化的蛋白质偶联方法，包括以下步骤：

1)设计蛋白质索烃反应的两个前驱体序列，分别是环状的SpyStapler-目标蛋白1的融合蛋白序列，以及线性的BDTag-目标蛋白2-SpyTag融合蛋白序列；

2)构建步骤1)所述两个前驱体序列对应的编码基因，并引入载体质粒；

3)在不同的细胞中分别表达两个反应前驱体，然后分别将它们纯化出来，并在体外将两个反应前驱体在一定条件下混和，该过程中两个反应前驱体发生结构重组，继而原位形成异肽键，实现异质索烃结构的制备；或者，在细胞中共表达两个反应前驱体，两个反应前驱体在胞内进行结构重组，进而原位形成异肽键，实现异质索烃结构的制备，然后纯化出异质索烃结构的蛋白质。

2.如权利要求1所述的蛋白质偶联方法，其特征在于，步骤1)中所述BDTag、SpyTag和SpyStapler的氨基酸序列分别如序列表中SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示，或是其保持了偶联反应性的突变体；BDTag、SpyTag和SpyStapler的突变体的氨基酸序列分别如序列表中SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示。

3.如权利要求1所述的蛋白质偶联方法，其特征在于，步骤1)中，在SpyStapler-目标蛋白1的融合蛋白的N端和C端分别融合分离型内含肽的C端部分和N端部分。

4.如权利要求1所述的蛋白质偶联方法，其特征在于，步骤1)在融合蛋白的N端设计His标签序列，在步骤3)通过镍亲和层析进行蛋白纯化。

5.如权利要求1所述的蛋白质偶联方法，其特征在于，步骤2)将环状SpyStapler-目标蛋白1的融合蛋白序列和线性BDTag-目标蛋白2-SpyTag融合蛋白序列对应的编码基因分别构建在表达载体上，或者将二者构建在同一个共表达载体上。

6.如权利要求1所述的蛋白质偶联方法，其特征在于，所述目标蛋白1和目标蛋白2是两种不同的蛋白质。

7.如权利要求6所述的蛋白质偶联方法，其特征在于，所述环状的SpyStapler-目标蛋白1的融合蛋白序列如序列表中SEQ ID NO：6所示，线性的BDTag-目标蛋白2-SpyTag融合蛋白序列如序列表中SEQ ID NO：5所示；或者，所述环状的SpyStapler-目标蛋白1的融合蛋白序列如序列表中SEQ ID NO：8所示，线性的BDTag-目标蛋白2-SpyTag融合蛋白序列如序列表中SEQ ID NO：7所示。