[发明专利]一种快速PCR扩增试剂盒及其应用方法在审
| 申请号： | 201910504468.7 | 申请日： | 2019-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN110527711A | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 孙晓娇;张文平 | 申请（专利权）人： | 江苏莱尔生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 32270 南京科知维创知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 许益民<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 225700 江苏省泰州市泰州医*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内参 试剂盒 内参基因引物 上游引物F 下游引物R 扩增 核苷酸序列 缓冲液体系 扩增试剂盒 一步法PCR 高级结构 快速PCR 微量DNA 长片段 错误率 热启动 增强剂 靶点 样本 应用 检测 资金 | ||
1.一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括DNA聚合酶、dNTPs、内参基因引物群以及缓冲液体系；所述的内参基因引物群包括内参A片段和内参B片段，所述内参A片段包括上游引物F和下游引物R；所述内参B片段包括上游引物F和下游引物R；其中，所述内参A片段的所述上游引物F的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，所述下游引物R的核苷酸序列为SEQ ID NO：2；所述内参B片段的所述上游引物F的核苷酸序列为SEQ ID NO：3，所述下游引物R的核苷酸序列为SEQ ID NO：4。
2.如权利要求1所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述内A参片段大小为：200-300bp，所述内参B片段大小为：1000-1100bp。
3.如权利要求2所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述上游引物F和所述下游引物R的浓度为10μmol/L。
4.如权利要求1或2所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述的快速PCR扩增试剂盒还包括PCR增强剂，所述的PCR增强剂包含DMSO、甘油、甲酰胺中的一种或两种。
5.如权利要求4所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述DMSO的工作浓度为1-10％(v/v)，所述甘油的工作浓度为1-20％(v/v)，所述甲酰胺的工作浓度为1-10％(v/v)。
6.如权利要求1或2所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述缓冲液体系为10×缓冲液，包括浓度为500mmol/L Tris-HCl和20mmol/L的MgCl2，所述Tris-HCl的PH值为9.0。
7.如权利要求1或2所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述dNTPs的浓度为2.5mmol/L；所述DNA聚合酶活性为2.5U/μL。
8.如权利要求1或2所述的一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述的DNA聚合酶为Phire热启动IIDNA聚合酶。
9.一种应用如权利要求1-8任一项所述的快速PCR扩增试剂盒的进行PCR扩增的应用方法，其特征在于，所述的PCR反应体系为：
PCR扩增条件为：95℃预变性3min，95℃变性10s，60℃退火15s，72℃延伸30s，30个循环后延伸5min。
10.如如权利要求9所述的应用快速PCR扩增试剂盒的进行PCR扩增的应用方法，其特征在于，所述的快速PCR扩增试剂盒的应用方法还包括进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，稳定电压为130V，电泳时间20分钟。
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