[发明专利]一种基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法

权利要求书

1.一种基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，包括步骤：

S1、取含有核黄素和多酚的蛋白溶液，加入自由基捕获剂POBN，得混合溶液A；所述混合溶液A中，POBN浓度为20～60mM；所述自由基捕获剂POBN为a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮；

S2、将步骤S1所述混合溶液A进行UVA照射，得混合溶液B；

S3、用毛细管吸取步骤S2所述混合溶液B，进行电子自旋共振检测；所述电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3460～3490G；扫描宽度：50～100G；频率：9.75GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：9.50～10.50mW；接收增益：1.00×10⁵～1.00×10⁶；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：3000.00msec～8000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec；

步骤S1所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液的制备方法为：取肌原纤维蛋白用pH6、25mM磷酸盐缓冲液溶解，制备成浓度为30～60mg/mL肌原纤维蛋白溶液，加入核黄素和海带多酚，得含有核黄素和多酚的蛋白溶液；其中，以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的总量计，每克肌原纤维蛋白添加5～150nmol核黄素，每克肌原纤维蛋白添加10～150μmol海带多酚；其中，所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。

2.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，步骤S2所述UVA照射的时间为0.5～3h，照射强度为5～10W/m²。

3.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，包括步骤：

S1、从鲅鱼鱼肉中提取肌原纤维蛋白，用pH6、25mM磷酸盐缓冲液溶解，制备成50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入核黄素和海带多酚，得含有核黄素和多酚的蛋白溶液；以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的总量计，每克肌原纤维蛋白添加100nmol核黄素，每克肌原纤维蛋白添加150μmol海带多酚；向所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液中加入自由基捕获剂POBN，添加量为60mM，得混合溶液A；其中，所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl；

S2、将步骤S1所述混合溶液A在4℃条件下进行UVA紫外照射，照射时间为0.5h，照射强度为10W/m²，得混合溶液B；

S3、将步骤S2所述混合溶液B用毛细管吸取进行电子自旋共振检测；电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：10.04mW；接收增益：1.00×10⁶；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：320.00msec。