[发明专利]一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法

说明书

本发明公开了一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法。包括步骤：S1、取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂a‑(4‑吡啶基‑1‑氧)‑N‑叔丁基硝基酮，终浓度为20～50mM；S2、将步骤S1所得混合样品进行UVA照射；S3、将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测。本发明应用ESR技术检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中氧化物质的生成，为肌原纤维蛋白加工过程中的品质检测提供更快速、准确的方法及明确的规范。

技术领域

本发明属于食品质量检测技术领域，尤其涉及一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法。

背景技术

褐藻多酚(Phlorotannin)是从褐藻中提取出的一类酚类化合物，是间苯三酚衍生物，其具有抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、免疫、清除自由基等生物活性。但是，目前工业上对褐藻的利用主要是从中提取褐藻胶、碘、甘露醇及氯化钾，很少涉及到褐藻多酚的提取及利用。

辐照技术已被越来越多的国家应用于食品保鲜、质量和安全控制及品质提高等领域。UVA波段是紫外线波长划分的一部分，波长320～420nm。通过紫外 (UVA)照射促进自由基的形成，可导致褐藻多酚产生的自由基大量积累，造成多酚氧化和抗氧化的失衡，使之更倾向于氧化。

常用化学方法来进行蛋白、脂质的氧化程度的检测，如采用硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化的终产物之一丙二醛的含量来评价脂质的过氧化程度。但现有的技术存在灵敏度和精确度不高的问题，同时脂质过氧化其终产物比较复杂，除了丙二醛以外还有其他的醛类产物，会干扰测定结果的准确度和精度。

电子自旋共振波谱(electron spin resonance,ESR)法是一种根据电子自旋共振波谱吸收程度，检测组织、细胞、溶液中自由基的有效方法。对于自由基的检测可采用自旋捕获的方法，较为准确地检测不同种类自由基。捕获剂POBN 与经过UVA诱导后的褐藻多酚所产生的自由基反应，形成的产物具有相对较长的寿命而且有特征的ESR波谱，可以方便地通过ESR波谱仪进行检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，用于较为准确、快速地检测不同种类自由基。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：

S1、取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮(POBN)，得混合样品；所述POBN的终浓度为 20～50mM；

S2、将步骤S1所述混合样品进行UVA照射；

S3、将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3450～3490G；扫描宽度：55～105G；频率：9.00～10.00GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：8.00～10.00mW；接收增益： 1.00×10⁵～1.00×10⁶；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4000.00～6000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec。

优选方式下，步骤S1所述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法为：取肌原纤维蛋白溶于pH6、25mM磷酸盐缓冲液中，配置成浓度为 35～70mg/mL的肌原纤维蛋白溶液，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入褐藻多酚，得含有多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；所述褐藻多酚的添加量为：以肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的含量为基准，每克肌原纤维蛋白添加20～700μmol 褐藻多酚；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。