[发明专利]一种小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法包括：

步骤一，第一轮PCR:以mMIP3α-F，R1引物扩模板mouse MIP3α质粒；以F1，mEndoglin-R引物扩模板mouse Endoglin；

步骤二，第二轮PCR:以第一轮PCR产物为模板，以mMIP3α-F，mEndoglin-R为引物做PCR扩增；

步骤三，pcDNA3.1(+)/Fc质粒和目的片段均使用AflII/BamHI酶切，回收后连接、转化、涂板、筛选。

2.如权利要求1所述的小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一PCR反应条件：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸120s，循环25次；72℃充分延伸5min。

3.如权利要求1所述的小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤二PCR反应条件：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸120s，循环30次；72℃充分延伸5min。

4.如权利要求1所述的小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述PCR产物的凝胶回收包括：

向DNA Binding column B吸附柱中加入500ul平衡液，12000rpm离心30秒，倒净收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中；

将凝胶液转移至吸附柱中，室温放置2分钟；12000rpm离心30秒，倒净收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中；

向吸附柱中加入600ul已加好无水乙醇的漂洗液washing,12000rpm离心30秒，倒净收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中；

在此时间内将洗脱用的超纯水50℃水浴预热；

12000rpm离心2分钟,以彻底去除吸附柱中残余漂洗液；

将吸附柱置于干净的已做好名称标记的1.5ml离心管中，向柱膜中央悬空滴加30-50ul预热好的超纯水，室温放置2分钟；12000rpm离心1分钟，丢弃吸附柱，回收完毕；

使用1.2％的琼脂糖凝胶电泳检测。

5.如权利要求1所述的小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述重组质粒PCR鉴定先94℃预变性5min，然后94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸120sec，30个循环，最后72℃延伸5min。所得产物以1.2％琼脂糖电泳检测。

6.如权利要求5所述的小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述重组质粒QC鉴定的PCR反应条件：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸120s，循环30次。

7.一种由权利要求1所述小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白的制备方法制备的小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白，其特征在于，所述小鼠MIP3α-endoglin Fc融合蛋白为MIP3α-Endoglin和Fc的二聚体融合蛋白，MIP3α-Endoglin与Fc之间通过免疫球蛋白的铰链区或柔性肽段连接。