[发明专利]一种胎盘间充质干细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201910499297.3 | 申请日： | 2019-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN110257326A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 朱灏 | 申请（专利权）人： | 华夏源（上海）细胞基因工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 武汉尚齐知识产权代理事务所(普通合伙) 42261 | 代理人： | 林霞 |
| 地址： | 201100 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胎盘间充质干细胞 制备 剪碎 培养液 红细胞裂解液 混合酶溶液 绒毛膜组织 消化 胎盘组织 干细胞 绒毛膜 肉糜状 消化液 裂解 去除 稀释 小块 重悬 足量 沉淀 过滤 清洗 震荡 血管 细胞 成功 | ||
1.一种胎盘间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)组织块前处理：胎盘于某特定保存液中保存，48h内处理；取出胎盘置于无菌托盘内，剪取胎盘中心鲜红的绒毛膜组织，去除两面的上皮层和钙化层；将绒毛膜组织剪碎为0.8-1.2cm3左右的小块，用清洗液清洗8-10次左右；剔除白色可见血管，将组织块剪碎为肉糜状；
(2)消化离心：加入混合酶溶液消化；血清终止消化，等体积PBS稀释后，过200目滤网；收集滤液离心，沉淀用红细胞裂解液重悬，静置裂解，再离心；沉淀用培养液重悬，接种至培养皿；
(3)培养，收获细胞：培养第3天，更换培养液；培养第6-8天，观察到细胞形成小型集落时，更换培养液；第9--12天，细胞生长接近融合状态,加入消化液消化细胞，获得胎盘间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述胎盘间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述清洗液为含1％双抗的PBS或者生理盐水。
3.根据权利要求1所述胎盘间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述混合酶溶液为0.5mg/ml胶原酶I、0.1mg/ml Dispasae II、0.25mg/ml DNA酶、0.05％胰酶-EDTA的混合物。
4.根据权利要求1所述胎盘充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述混合酶消化的方法为，先加入胶原酶I、Dispasae II、DNA酶，37度震荡消化40min；再加入胰酶-EDTA，37度震荡消化30min；震荡速率为150-160rpm。
5.根据权利要求1所述胎盘间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述培养液为含有20％胎牛血清的a-MEM或D-MEM培养液。
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