[发明专利]一种用于区分检测Cys/Hcy和GSH的荧光探针及其制备方法

权利要求书

1.一种区分检测Cys/Hcy和GSH的荧光探针NBD-O-1，其特征在于，结构式为：

。

2.如权利要求1所述的一种区分检测Cys/Hcy和GSH的荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤如下：

（1）化合物1 10-（二乙基氨基）-3-羟基-5,6-二氢苯并[c]呫吨12鎓的制备：将等摩尔量的4-二乙氨基水杨醛和6-羟基-1-四氢萘酮加入圆底烧瓶中，然后加入冰醋酸和高氯酸，加热回流1.5小时，冷却，倒入乙酸乙酯：石油醚=1:1的溶液中，静置过滤得化合物1；

（2）10-（二乙基氨基）-3-（（7-硝基苯并[c][1,2,5]恶二唑-4-基）氧基）-5,6-二氢苯并[c]呫吨12鎓的制备：将步骤（1）制得的化合物1溶于乙醇中，搅拌下加入等摩尔量的4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑，随后加入催化剂量的三乙胺，室温搅拌过夜，然后减压去除溶剂，残留物柱色谱分离得目标产物。

3.如权利要求2所述的一种区分检测Cys/Hcy和GSH的荧光探针的合成方法，其特征在于，所述柱色谱的洗脱剂为体积比 20 ：1 的二氯甲烷和甲醇的混合物。

4.如权利要求1所述的荧光探针在制备细胞中Cys/Hcy和GSH的区分检测试剂中的应用。

5.如权利要求1所述的荧光探针在制备动植物活体成像试剂中的应用。

6.一种非疾病诊断和治疗的区分检测Cys/Hcy和GSH的方法，其特征在于，步骤为：

（1）用二甲基亚砜配制2 mM 权利要求1所述的NBD-O-1的荧光探针储备液；用蒸馏水分别配制2 mM的Cys、Hcy和GSH溶液；

（2）将体积总量为2 mL的 CH₃CN和pH 为 7.4的PBS 缓冲溶液，以及10 µL荧光探针储备液加入荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上测定探针的荧光光谱，然后逐渐加入不同体积的Cys、Hcy和GSH溶液，在荧光分光光度仪上测定其荧光光谱，加入Cys、Hcy后探针在550 nm和625 nm处出现两个新的荧光发射峰；加入GSH后探针仅在625 nm处出现新的荧光发射峰，实现区分检测。