[发明专利]一种基于点击化学的DNA功能化量子点的制备方法及其在生物标记与检测中的应用

权利要求书

1.一种叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化量子点，其特征在于，所述叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化量子点通过以下合成方法制备获得，具体包括如下步骤：

1）将氯化镉、氯化锌和N-乙酰-L-半胱氨酸溶解于去离子水中，得到混合溶液A，其中氯化镉、氯化锌、N-乙酰-L-半胱氨酸的摩尔比为1: (0.5～3): (1～10)，用氢氧化钠溶液调节混合溶液A的pH值至8.0～9.0，混合水溶液中氯化镉浓度为0.001～0.0625 mM；取亚碲酸钠与硼氢化钠，使其摩尔比为2：1，加入10 mL单口烧瓶中，置于冰浴、无氧条件下反应5 h，为混合溶液B，快速将混合溶液B转入混合溶液A中，最后加入20～200 µM 叠氮或二苯基环辛炔与硫代磷酸酯共同修饰的DNA，搅拌均匀后转移至水热反应釜中，于150～200 ℃下反应20 ～35 min，得到叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化CdTe:Zn²⁺量子点；所述的叠氮或二苯基环辛炔与硫代磷酸酯共同修饰的DNA，其 5’端修饰有硫代磷酸酯，3’端修饰有叠氮或二苯基环辛炔的核酸序列分别为G*G*G* G*G*G* G*G*A AAA AAA ACC TTC CTC CGC AATACT CCC CCA GGT AAA-N₃、G*G*G* G*G*G* G*G*A AAA AAA ACC TTC CTC CGC AAT ACTCCC CCA GGT AAA-DBCO， *为硫代磷酸酯修饰，N₃代表叠氮，DBCO代表二苯基环辛炔；

2）将所得到的叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化CdTe:Zn²⁺量子点溶液用分子截留量为30 KD的超滤管进行离心纯化，将废液倒掉，再加入超纯水洗涤离心，循环洗涤离心4次，将超滤管倒置离心，得到叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化CdTe:Zn²⁺量子点纯品，置于4 ℃下保存备用。

2.权利要求1所述的叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化量子点在蛋白标记中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛋白为葡萄糖氧化酶。

4.权利要求1所述的二苯基环辛炔修饰DNA功能化量子点在细胞标记中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述细胞表面表达唾液酸受体。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞为HeLa细胞。

7.权利要求1所述的叠氮或二苯基环辛炔修饰DNA功能化量子点在纳米材料、核酸、病毒及细菌标记中的应用。

8.一种葡萄糖氧化酶-量子点GOx-QDs复合物，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶-量子点GOx-QDs复合物通过以下合成方法制备获得，具体包括如下步骤：

首先，将葡萄糖氧化酶GOx进行DBCO修饰：称取0.5 mg NHS-DBCO试剂，加入20 μL DMSO溶解；再称取10 mg GOx，溶于500 μL pH 7.4, 20 mM Tris-HCl缓冲溶液，将溶于DMSO的NHS-DBCO试剂加入上述GOx溶液中，反应过夜；用30 KD超滤管对上述反应溶液进行离心超滤得到GOx-DBCO，超滤时间为10 min，转速为5000 rpm；最后，将超滤得到的GOx-DBCO溶液加入权利要求1所述的叠氮修饰DNA功能化量子点溶液中，反应4 h，再用100 KD超滤管对上述反应溶液进行离心超滤，超滤时间为10 min，转速为5000 rpm，将得到的葡萄糖氧化酶-量子点GOx-QDs置于4℃冰箱中保存，备用。

9.权利要求8所述的葡萄糖氧化酶-量子点GOx-QDs复合物在制备检测葡萄糖的试剂中的应用。