[发明专利]一种负载rADSCs的明胶微球及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种负载rADSCs的明胶微球及其制备方法和应用。其制备过程为：以脂肪干细胞和明胶水溶液的混合液为内相；以油相为外相，通过微流控装置，制备微液滴；然后微液滴成胶后与京尼平溶液发生交联反应即可得到负载rADSCs的明胶微球。本发明负载rADSCs的明胶微球，原位包封活的rADSCs，同时能够保持rADSCs高的活性，使其能够很好的促进糖尿病创面的愈合和创面血管的形成，同时还具有很好的降解作用，在创面愈合时，负载rADSCs的明胶微球也正好基本上降解完全。本发明所述负载rADSCs的明胶微球同时兼具有良好的创面愈合、血管形成作用以及降解作用，在创面愈合和血管形成方面具有极大的应用前景，可制备成为创面愈合药物、血管形成药物进行应用。

技术领域

本发明涉及介入医学技术领域，更具体地，涉及一种负载rADSCs的明胶微球及其制备方法和应用。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)移植已经成为一种有前途的治疗策略。MSCs能够稳定地离体扩增，同时保持分化成表皮和真皮谱系细胞的能力，甚至皮肤附属物如毛囊、汗腺和微血管也可以在MSC治疗的伤口中快速再生。直接将细胞注射到修复部位可以将手术的侵袭性降到最低。然而，这种方式细胞与宿主组织的整合程度较低，且细胞存活率较低，导致临床移植成功率低。

针对上述问题，一种潜在的有吸引力的策略是将干细胞悬浮在水凝胶中，有望提高供体细胞的存活，并为成功移植建立良好的微环境。目前以报道的水凝胶如聚乙二醇双丙烯酸酯(PEGDA)、透明质酸(HA)、海藻酸、胶原蛋白、明胶等已应用于干细胞负载，但由于难愈合创面较大，片层状结构组织浸润性较差，影响细胞的存活和功能，且缺乏足够的氧气和营养供应，导致促进创面修复能力差，降低临床移植的成功率。另外，细胞与水凝胶材料之间有限的界面相互作用限制了组织长入。因此，目前的水凝胶难以适应于干细胞移植，需要开发新的水凝胶已适应于干细胞的移植。

微凝胶是一种微米级的亲水性聚合物三维网络，是一种理想的细胞载体，可以将细胞嵌入类似ECM的微环境中，将细胞传递到目标组织，从而保护细胞免受恶劣环境的伤害。微凝胶具有高表面体积比的特性，使微凝胶内部和外部之间实现快速的物质交换，从而维持了种子细胞的生存能力，因此，利用水凝胶微球包封干细胞具有很大的组织再生潜力。采用微流控方法制备出具有合适尺寸且均一、形状可控的凝胶微球，具有较高的细胞封装效率和细胞存活率。制备这些微球最常用的材料是PEGDA和海藻酸钠。然而，这些载体缺乏细胞黏附位点，极大地限制了细胞增殖、迁移和形成组织。在溶胶-凝胶转变过程中使用具有细胞毒性的引发剂或自由基聚合反应进行交联，降低了负载细胞的生物活性，从而限制了其生物应用。

ADSCs具有旁分泌作用，分泌大量生长因子如bFGF、VEGF，改善细胞增殖，用于组织的修复，但是由于缺乏合适的细胞载体，限制了基于ADSCs促进糖尿病创面愈合的成功应用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中，缺乏合适的细胞载体负载rADSCs，导致其应用受限制的问题，提供一种负载rADSCs的明胶微球。本发明所述负载rADSCs的明胶微球为微米级别的微球，原位包封活的rADSCs，同时能够保持rADSCs高的活性，对于创面的愈合、血管的形成具有很好的作用，同时还具有很好的降解作用。

本发明的另一目的在于提供所述负载rADSCs的明胶微球的制备方法。

本发明的再一目的在于提供所述负载rADSCs的明胶微球的应用。

本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：

一种负载rADSCs的明胶微球，通过如下步骤制备得到：

S1.培养脂肪干细胞(rADSCs)，并配置成为干细胞悬浮液，然后与明胶水溶液混合，即得内相；以油相为外相，通过微流控装置，分别控制内相和外相的流速为1～10μL/min和20～200μL/min；并以外相为收集相，收集微液滴；