[发明专利]甬优4949种子纯度检测的SSR引物及方法

说明书

本发明公开了甬优4949种子纯度检测的SSR引物，所述SSR引物包括引物对RM72或引物对RM224；其中，引物对RM72包含：正向引物，其从5’端到3’为：CCGGCGATAAAACAATGAG，反向引物，其从5’端到3’为：GCATCGGTCCTAACTAAGGG；引物对RM224包含：正向引物，其从5’端到3’为：ATCGATCGATCTTCACGAGG，反向引物，其5’端到3’为：TGCTATAAAAGGCATTCGGG。本发明还提供了甬优4949种子纯度检测方法，通过特异性条带可用来检测甬优4949种子纯度。

技术领域

本发明涉及种子检测技术领域。更具体地说，本发明涉及一种用于甬优4949种子纯度的SSR引物及方法。

背景技术

甬优4949种子是武汉佳禾生物科技有限责任公司与宁波市种子公司研发出的籼粳杂交新品种，近几年推广应用面积达到50万亩，并且还在逐年上升阶段。甬优4949不仅在普通栽培模式种植下应用广泛，作为再生稻和虾稻也表现良好。甬优4949种子需求量不断增大，种子真实性对于品种来说是至关重要的。不同的水稻种子，检测种子真实性的技术方法不尽相同，检测甬优4949种子真实性需要选择特定的检测引物。目前还没有公开甬优4949种子检测的引物及方法。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种甬优4949种子纯度检测的SSR引物，利用引物对RM72对甬优4949种子进行检测，产生的母本特异性条带大小为180bp，产生的父本特异性条带大小为150bp，子代同时兼有母本、父本特异性条带；利用引物对RM224对甬优4949种子进行检测，产生的母本特异性条带大小为120bp，产生的父本特异性条带大小为160bp，子代同时兼有母本、父本特异性条带；通过特异性条带可用来检测甬优4949种子纯度。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种甬优4949种子纯度检测的SSR引物，所述SSR引物包括引物对RM72或引物对RM224；

其中，引物对RM72包含：正向引物，其从5’端到3’为：CCGGCGATAAAACAATGAG，反向引物，其从5’端到3’为：GCATCGGTCCTAACTAAGGG；

引物对RM224包含：正向引物，其从5’端到3’为：ATCGATCGATCTTCACGAGG，反向引物，其5’端到3’为：TGCTATAAAAGGCATTCGGG。

本发明还提供了一种甬优4949种子纯度检测方法，包括以下步骤：

S1、提取待测甬优4949种子的DNA；

S2、以提取的DNA为模板，使用引物对RM72或引物对RM224进行PCR扩增，得到扩增产物；

S3、对S2中得到的扩增产物进行凝胶电泳检测；

S4、根据电泳分离出来的条带，只有同时具有亲本特异条带的单株才为真正的甬优4949种子，其中，引物对RM72产生的母本特异性条带大小为180bp，产生的父本特异性条带大小为150bp，引物对RM224产生的母本特异性条带大小为120bp，产生的父本特异性条带大小为160bp。

优选的是，所述的甬优4949种子纯度检测方法，S1中提取待测甬优4949种子的DNA具体包括：

A1、将待测种子置于离心管中，加入CTAB提取液，水浴；

A2、然后加入体积比为24:1的氯仿和异戊醇，混匀，离心，得到上清液，然后向上清液中加入异丙醇，混匀，离心，得到沉淀，洗涤，干燥后使用含有RNA酶的双蒸水溶解，即得甬优4949种子的DNA。