[发明专利]应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK-7的方法

权利要求书

1.一种应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK-7的方法，其特征在于，在枯草芽孢杆菌的染色体上进行了如下改造：

(1)将组氨酸激酶KinA的基因进行截短突变并且进行了组成型表达，同时敲除组氨酸激酶KinB的基因；所述截短突变是指敲除组氨酸激酶KinA基因的信号传导部分的PAS-A区域，敲除后的组氨酸激酶KinA基因kinA-ΔPAS-A的序列如SEQ ID NO.9所示；

(2)将含有P_hag启动子的Rap60基因整合到染色体上，并在染色体上Rap60基因下游整合两个拷贝的信号分子Phr60的表达框；

(3)使用P_abrB(cs-1)启动子替换丙酮酸激酶基因和十一碳烯基焦磷酸合成酶基因的启动子；所述P_abrB(cs-1)启动子的序列如SEQ ID NO.14所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述组氨酸激酶KinA的genebank ID为939230；所述组氨酸激酶KinB的genebank ID为937167。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述P_hag启动子序列如SEQ IDNO.16所示；所述转录因子Rap60的genebank ID为1115983；所述信号分子Phr60的表达框的序列如SEQ ID NO.17所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述丙酮酸激酶基因pyk的genebank ID为936596；所述十一碳烯基焦磷酸合成酶基因uppS的genebank ID为939640。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括使用P_{spoiia(cs-1,3)}启动子表达七聚二烯丙基二磷酸合成酶基因和4-羟基-3-甲基丁-2-烯基二磷酸还原酶基因；所述P_{spoiia(cs-1,3)}启动子的序列如SEQ ID NO.12所示。

6.一种生产七烯甲萘醌的重组菌，其特征在于，在枯草芽孢杆菌的染色体上进行了如下改造：

(1)将组氨酸激酶KinA的基因进行截短突变并且进行了组成型表达，同时敲除组氨酸激酶KinB的基因；所述截短突变是指敲除组氨酸激酶KinA基因的信号传导部分的PAS-A区域，敲除后的组氨酸激酶KinA基因kinA-ΔPAS-A的序列如SEQ ID NO.9所示；

(2)将含有P_hag启动子的Rap60基因整合到染色体上，并在染色体上Rap60基因下游整合两个拷贝的信号分子Phr60的表达框；

(3)使用P_abrB(cs-1)启动子替换丙酮酸激酶基因和十一碳烯基焦磷酸合成酶基因的启动子；所述P_abrB(cs-1)启动子的序列如SEQ ID NO.14所示。

7.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，步骤(1)中所述组氨酸激酶KinA的genebank ID为939230；所述组氨酸激酶KinB的genebank ID为937167。

8.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，步骤(2)中所述P_hag启动子序列如SEQ IDNO.16所示；所述转录因子Rap60的genebank ID为1115983；所述信号分子Phr60的表达框的序列如SEQ ID NO.17所示。

9.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，步骤(3)中所述丙酮酸激酶基因pyk的genebank ID为936596；所述十一碳烯基焦磷酸合成酶基因uppS的genebank ID为939640。

10.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌在权利要求6的基础上做了如下改造：使用P_{spoiia(cs-1,3)}启动子表达七聚二烯丙基二磷酸合成酶基因和4-羟基-3-甲基丁-2-烯基二磷酸还原酶基因；所述P_{spoiia(cs-1,3)}启动子的序列如SEQ ID NO.12所示。