[发明专利]一种大批量高效液相法合成比伐卢定保护五肽片段的工艺方法

说明书

本发明涉及比伐卢定的技术领域，具体来说，是一种大批量高效液相法合成比伐卢定保护五肽片段的工艺方法。使用Fmoc‑Pro‑OSu为起始原料，先与二肽进行缩合，得到的保护三肽与二肽再进行缩合，重结晶后即可得到该化合物。此方法的优点是反应条件温和，普通生产条件即可满足生产需求；采用结晶法对产品进行精制，相比柱层析成本低，操作简单，收率高；不使用氢氟酸等含氟类化合物，环境污染小。

技术领域

本发明涉及比伐卢定的技术领域，具体来说，是一种大批量高效液相法合成比伐卢定保护五肽片段的工艺方法。

背景技术

比伐卢定是一种水蛭素衍生物片段，于2000年经美国FDA批准上市。比伐卢定为直接凝血酶抑制剂，与血循环或血栓凝血酶催化位点与底物识别位点发生特异性结合，短暂抑制凝血酶的活性位点，可以直接抑制凝血酶的活性。比伐卢定用于临床具有较多的优点，可特异性直接抑制凝血酶活性，专一性强；半衰期较短，且对凝血酶可逆性抑制作用，抗凝效果可预测；该药物轻度肾功能损害患者也可使用，不需调整治疗方案，抗凝防栓安全有效。

比伐卢定是人工合成的含20个氨基酸的多肽类药物，序列为D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Gl u-Glu-Tyr-Leu-OH。本专利申请涉及的多肽片段为比伐卢定序列中第4-8位氨基酸，序列为：Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-OH。多肽类化合物合成方法主要分为两大类，一类是采用逐步偶联的方法进行合成，该方法每偶联一个氨基酸都需要纯化，操作繁琐，效率低；另一种方法是分别合成出不同的片段，再分别进行偶联。第二种方法是目前最常用的方法，其片段多采用液相合成法、固相法及液固法三种进行合成。

固相法具有操作简单，反应条件可控等优点，但是该方法合成周期长，使用大量的溶剂，还需要使用氢氟酸三氟乙酸等含氟酸类，需使用昂贵的特殊树脂和大量特殊保护的氨基酸等，造成多肽生产成本较高，难以实现大规模合成。

液相法具有合成规模大，合成成本低等优点，且由于是均相反应，可以选择的反应条件更加丰富，因此应用比较广泛。其中专利CN103242431A液相法合成五肽，使用Fmoc-Pro-OSu为起始原料与四肽进行缩合，制备该化合物，该方法会产生九肽、十三肽等杂质，这些多肽杂质用普通精制方法很难去除，需要采用硅胶柱层析的方法进行纯化，收率较低，成本较高，且会产生大量废硅胶，增加生产成本的同时也污染环境。

发明内容

针对现有技术的制备方法容易生产杂质、纯化难度大、收率低、成本高等问题，本发明提供一种大批量高效液相法合成比伐卢定五肽片段的工艺方法，以解决上述技术问题。

术语说明:

缩合剂：能引起缩合反应的试剂，在多肽反应中指能促进氨基与羧基偶联形成肽键的试剂。

活化助剂：在多肽缩合反应中，能够协助缩合剂更好的促进缩合反应的试剂。

Fmoc：9-芴甲氧羰基。

OSu：N-羟基琥珀酰亚胺基。

本发明的技术方案为：

一种大批量高效液相法合成比伐卢定保护五肽片段的工艺方法，比伐卢定保护五肽片段氨基酸序列为：Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-OH，其结构式如下：

比伐卢定保护五肽片段的合成步骤具体如下：

(1)三肽的合成：