[发明专利]酿脓链球菌的CRISPR核酸酶SpCas9 的截短变异体及其应用

权利要求书

1.一种CRISPR-Cas9核酸酶，属于CRISPR-Cas9系统，具有与野生型CRISPR-Cas9核酸酶相当的剪切活性，所述CRISPR-Cas9核酸酶是将野生型CRISPR-Cas9核酸酶的第180位到299位的氨基酸截掉后所得；所述野生型CRISPR-Cas9核酸酶来源于酿脓链球菌，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；或者所述CRISPR-Cas9核酸酶的氨基酸如SEQ ID NO.16所示。

2.一种多核苷酸序列，其编码权利要求1中所述的CRISPR-Cas9核酸酶。

3.一种表达载体，其特征在于含有如权利要求2所述的多核苷酸序列。

4.一种宿主细胞，其是经过权利要求3所述的表达载体转化后得到。

5.一种制备权利要求1所述的CRISPR-Cas9核酸酶的方法，其特征在于,包括以下步骤：首先,构建含有权利要求2所述的多核苷酸序列的表达载体；将所述表达载体转化宿主细胞，筛选并挑出单克隆；将筛选得到的单克隆细胞诱导表达，并通过亲和层析或/和离子交换方法从表达产物中分离出所述的CRISPR-Cas9核酸酶。

6.权利要求1所述的CRISPR-Cas9核酸酶、权利要求2中所述的多核苷酸序列或权利要求3中所述的表达载体作为基因编辑工具的用途，所述的用途不包括疾病的治疗与诊断。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述编辑是单点编辑，或者是编辑位点大于等于两个的多点编辑;所述编辑方式选自基因的删除、突变、插入、倒位、移位、重复或易位。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述基因编辑工具还包括与靶标DNA片段匹配的引导sgRNA。

9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，利用权利要求1所述的CRISPR-Cas9核酸酶与能够介导它的sgRNA组合，对基因进行编辑。

10.根据权利要求6所述的用途，其特性在于，将权利要求3所述的载体和与之匹配的引导sgRNA一同转入宿主细胞，对基因进行编辑。

11.根据权利要求7所述的用途，其特性在于，所述的单点或多点的基因编辑是利用权利要求1所述CRISPR-Cas9核酸酶对双链DNA进行剪切，并通过宿主细胞的修复系统对断裂的缺口进行修复。