[发明专利]纯化的双阴性T细胞及其制备和应用

权利要求书

1.一种细胞制剂，其特征在于，所述的细胞制剂包含DNT细胞群，并且所述的DNT细胞群中，占总细胞数量95％以上的细胞不分泌表达IL-17，较佳地，98％以上，更佳地，99％以上，最佳地，99.9％以上。

2.如权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述的DNT细胞群中，占总细胞数量95％以上的细胞具有表面抗原CD3+和TCRαβ。

3.如权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述的DNT细胞群中，占总细胞数量50％以上的细胞高表达LAG3基因。

4.一种制备权利要求1所述细胞制剂的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(a)提供单个核细胞群(PBMCs)，通过分选获得DNT细胞为主的第一细胞亚群；

(b)从第一细胞亚群中去除分泌IL-17的DNT细胞后对其进行扩增培养，从而获得第二细胞亚群；或者

对第一细胞亚群进行扩增培养后去除分泌IL-17的DNT细胞，从而获得第二细胞亚群；

(c)任选地，对第二细胞亚群中的DNT细胞进行进一步分选，从而获得第三细胞亚群；

(d)将第二或第三细胞亚群与合适的载体混合，从而得到权利要求1所述细胞制剂。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，去除单个核细胞群中的B细胞、CD4和CD8 T细胞、γδT细胞、1型NKT和2型NKT细胞，从而获得DNT细胞为主的第一细胞亚群。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，利用选自针对组A表达蛋白的一种或多种抗体，在培养前去除分泌IL-17的DNT细胞，其中组A包括：S100a6、Tmem176b、CXCR6、Ramp1、Tmem176a、Lgals1、Lgals3、ACTN2、ICOS、CCR2、CD82、CD127(IL7r)、Ltb4r1、Hk2、TNFRSF25、Ly6a、BLK、Lsp1、Ly6e、Itgb7、Itm2b、S100a10、Ly6g5b、Thy1、CD40Ig、Ramp3、Gm2a或其组合；

较佳地，组A为：S100a6、CXCR6、ICOS、CCR2、CD82、CD127、Ltb4r或其组合。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，选自针对组B表达蛋白的一种或多种抗体，在培养后体系中去除分泌IL-17的DNT细胞，其中组B包括：IL-17a、Lgals1、Ly6a、CXCR6、S100a6、Lgals3、Lta、IL-4、IL-3、ICOS、S100a10、Ramp1、Tmem176b、Tnfrsf4、AA467197、Itm2b、Thy1、Igtp、Arl6ip1、Serpine2、Ltb、Tnfrsf25、Furin、Tmem176a、Ifi27l2a、Gbp2、Emp3、Ltb4r1、Tspo、Cst3、Vim、CD200或其组合；

较佳地，组B为：Lgals1、Ly6a、CXCR6、S100a6、Lgals3、Lta、ICOS、S100a10、Tnfrsf4、或其组合。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，在抗原呈递细胞和/或抗原肽存在的条件下进行扩增培养。

9.一种权利要求1所述细胞制剂的用途，其特征在于，用于制备一药物组合物，所述的药物组合物用于治疗选自下组的疾病：

肿瘤、感染性疾病、移植排斥反应、移植物抗宿主病、过敏性哮喘、自身免疫病、代谢综合征、脑卒中、或其组合。

10.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有权利要求4所述方法制备的细胞制剂，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。