[发明专利]通过发酵工艺制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法

权利要求书

1.一种通过发酵工艺制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：采用枯草芽孢杆菌株进行发酵，制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶。

2.一种权利要求1所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)微生物发酵过程：

取液体培养基置于三角瓶中，以枯草芽孢杆菌株与液体培养基的体积比为菌体种子的接种量，按1-10％v/v的接种量接入枯草芽孢杆菌株的菌体种子，在三角瓶中得到发酵原液，进行摇瓶发酵，发酵条件为20-40℃，控制摇瓶转速为100-300rpm，进行发酵培养至少48h，得到发酵液；所述液体培养基包括麦芽糖、玉米粉、酵母膏和无机盐，所述无机盐为质量浓度比为1:5-5:1的MgSO₄·7H₂O和K₂HPO₄·3H₂O的混合盐；

(2)γ-谷胺酰转肽酶的分离和纯化过程：

将在所述步骤(1)中制备的发酵液经过离心除去菌体，取上清液用硫酸铵盐析法纯化，即得溶菌酶。

3.根据权利要求2所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)配制的发酵原液中，所述麦芽糖的浓度范围为20-80g/L，所述酵母浸膏浓度范围为10-40g/L，玉米粉浓度范围为1-30g/L。

4.根据权利要求3所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)配制的发酵原液中，所述麦芽糖的浓度为60g/L，所述酵母浸膏浓度为32.4g/L，玉米粉浓度范围为10g/L。

5.根据权利要求2所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)配制的发酵原液中，所述MgSO₄·7H₂O浓度范围为0.5-5g/L，K₂HPO₄·3H₂O浓度范围为1-5g/L。

6.根据权利要求5所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)配制的发酵原液中，所述MgSO₄·7H₂O浓度为1g/L，K₂HPO₄·3H₂O浓度为2g/L。

7.根据权利要求2所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)中配制发酵原液时，接种量为6％v/v。

8.根据权利要求2所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)中进行发酵时，控制发酵条件为28-40℃，发酵原液的初始pH为5.5-7.5。

9.根据权利要求8所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：在所述步骤(1)中进行发酵时，控制发酵条件为37℃，控制摇瓶转速为200-300rpm，发酵原液的初始pH为6.0-6.5。

10.根据权利要求1所述制备具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的方法，其特征在于：所制备的具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶的活性达到1600±31U/L,所制备的具有抑菌作用的γ-谷胺酰转肽酶抑制荔枝胶孢炭疽菌抑菌率达36.36±2.20％。