[发明专利]一种牙鲆弹状病毒检测试纸及其制备方法

说明书

本发明公开了一种牙鲆弹状病毒检测试纸及其制备方法。所述检测试纸包括载体板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层、吸水垫，所述样品垫和吸水垫分别在载体板的两端，金标垫一端位于样品垫的下方，金标垫上载有胶体金标记的抗牙鲆弹状病毒G蛋白单抗，由杂交瘤细胞株HIRRV‑G‑4D10（CCTCC NO：C201869）所分泌，硝酸纤维素膜上依次划有检测线和质控线，其中检测线靠近样品垫侧，质控线靠近吸水垫侧，检测线包被抗牙鲆弹状病毒M蛋白单抗HIRRV‑M‑1F9和HIRRV‑M‑4D10混合单抗，质控线包被羊抗鼠IgG。本发明能够对牙鲆弹状病毒进行特异性检测，具有快捷迅速、灵敏准确、受影响小、成本低廉等优点，不受专业人员的限制。

技术领域

本发明涉及一种牙鲆弹状病毒(hirame rhabdovirus, HIRRV) 的检测试纸及其制备方法，属于免疫学、病毒学及诊断试剂交叉技术领域。

背景技术

牙鲆弹状病毒病是一种高致病性牙鲆疾病，而牙鲆弹状病毒 (hiramerhabdovirus, HIRRV) 是引发该病的病原。牙鲆弹状病毒是一种具有强烈致病性的单股负链RNA病毒，病毒粒子呈弹状，宽约60-80nm，长约为160-180nm，可引起牙鲆，香鱼（Plecoglossus altivelis）等肌肉组织器官及内脏出血，造血器官坏死，从幼鱼到成鱼均可被感染；人工感染真鲷（Pagrosomus major）、黑鲷稚鱼有强烈的致病性，对虹鳟（Oncorhynchus mykiss）也具致病性。发病季节多为冬季和早春，主要在低温条件下（水温≤15℃）发病，水温10℃时为发病高峰期，死亡率可高达60%。牙鲆弹状病毒易感宿主由海水鱼过渡到淡水鱼，流行区域和易感种群均有逐年扩大的趋势，阻碍了全球水产养殖业特别是海水养殖业的健康发展，带来严重的经济损失。通过胶体金试纸条这一检测手段有利于牙鲆弹状病毒防治工作的进行，对于养殖户而言可以有利于养殖户在养殖过程中对于牙鲆弹状病毒采取针对性的预防措施，降低养殖成本的同时提高经济效益。

目前该病毒常用的检测方法（例如组织病理技术、电镜技术、细胞培养技术）在准确性、灵敏性、安全性和花费等方面有各自的优点，但它们不同程度上受到需要专业人员和复杂仪器的限制。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种简便、快速、灵敏度高、特异性强、成本低廉的牙鲆弹状病毒检测试纸，其检测结果肉眼可见，不需要专业仪器设备。

本发明的另一个目的是提供上述牙鲆弹状病毒快速检测试纸的制备方法。

本发明的牙鲆弹状病毒检测试纸，包括：载体板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层、吸水垫，所述样品垫和吸水垫分别位于载体板的两端，硝酸纤维素膜检测层位于所述载体板的中部，所述金标垫一端位于样品垫的下方，另一端位于硝酸纤维素膜的上方，所述金标垫上载有胶体金标记的抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单抗HIRRV-G-4D10，所述硝酸纤维素膜上依次划有检测线和质控线，所述检测线靠近样品垫侧，质控线靠近吸水垫侧；所述检测线包被抗牙鲆弹状病毒M蛋白的单抗HIRRV-M-1F9和HIRRV-M-4D10混合单抗，质控线包被羊抗鼠IgG。

所述抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单抗HIRRV-G-4D10由名称为：杂交瘤细胞株HIRRV-G-4D10，保藏号为：CCTCC NO：C201869，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2018年3月29日的杂交瘤细胞分泌的。

所述抗牙鲆弹状病毒G蛋白单抗HIRRV-G-4D10能与分子量为60 kDa牙鲆弹状病毒蛋白条带发生特异性反应，且具有牙鲆弹状病毒中和活性。

所述抗牙鲆弹状病毒M蛋白的单抗HIRRV-M-1F9和HIRRV-M-4D10能与分子量为22kDa牙鲆弹状病毒蛋白条带发生特异性反应。

本发明的牙鲆弹状病毒检测试纸的制备方法如下：