[发明专利]一种基于RPA快速检测水稻恶苗病菌藤仓镰孢的方法

权利要求书

1.引物对，由引物F和引物R组成；

所述引物F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。

2.权利要求1所述的引物对的应用，为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4):

(b1)鉴定或辅助鉴定待测病菌是否为藤仓镰孢；

(b2)制备用于鉴定或辅助鉴定待测病菌是否为藤仓镰孢的试剂盒；

(b3)检测待测生物样本中是否含有藤仓镰孢；

(b4)制备用于检测待测生物样本中是否含有藤仓镰孢的试剂盒。

3.含有权利要求1所述引物对的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(c1)或(c2)：

(c1)鉴定或辅助鉴定待测病菌是否为藤仓镰孢；

(c2)检测待测生物样本中是否含有藤仓镰孢。

4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。

5.一种鉴定或辅助鉴定待测病菌是否为藤仓镰孢的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测病菌的总DNA；

(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板，采用权利要求1所述的引物对进行重组酶聚合酶扩增，如果PCR扩增产物中含有184bp±5bp的DNA片段、待测病菌为或候选为藤仓镰孢，如果PCR扩增产物中不含有184bp±5bp的DNA片段、待测病菌为或候选为非藤仓镰孢。

6.一种鉴定或辅助鉴定待测病菌是否为藤仓镰孢的方法，包括如下步骤：

检测待测病菌的总DNA中是否含有特异DNA片段，如果含有特异DNA片段、待测病菌为或候选为藤仓镰孢，如果不含有特异DNA片段、待测病菌为或候选为非藤仓镰孢；

所述特异DNA片段为藤仓镰孢的总DNA中权利要求1所述的引物对的靶序列。

7.一种检测待测生物样本中是否含有藤仓镰孢的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测生物样本的总DNA；

(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板，采用权利要求1所述的引物对进行重组酶聚合酶扩增，如果PCR扩增产物中含有184bp±5bp的DNA片段、待测生物样本中含有或疑似含有藤仓镰孢，如果PCR扩增产物中不含有184bp±5bp的DNA片段、待测生物样本中不含有或疑似不含有藤仓镰孢。

8.一种检测待测生物样本中是否含有藤仓镰孢的方法，包括如下步骤：

检测待测样本的总DNA中是否含有特异DNA片段，如果含有特异DNA片段、待测生物样本中含有或疑似含有藤仓镰孢，如果不含有特异DNA片段、待测生物样本中不含有或疑似不含有藤仓镰孢；

所述特异DNA片段为藤仓镰孢的总DNA中权利要求1所述引物对的靶序列。