[发明专利]一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法

说明书

本发明公开了一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，涉及葡萄糖氧化酶提取技术领域。本发明包括将菌种放入斜面培养基中恒温培养产生孢子并将孢子装入液体培养瓶中，充分混匀后培养制成菌液；将菌液接种至平皿培养基中培养直至长出菌落；将菌落置于发酵罐中扩大发酵培养获取发酵液；将发酵液离心后获取上清液即为葡萄糖氧化酶液；将葡萄糖氧化酶液浓缩干燥得到葡萄糖氧化酶。本发明通过菌种放入斜面培养基培养并制成菌液，将菌液接种至平皿培养基长出菌落，将菌落，置于发酵罐中扩大发酵获取发酵液；将发酵液离心获取上清液并对上清液浓缩干燥获取葡萄糖氧化酶；实现了大批量高效提取葡萄糖氧化酶。

技术领域

本发明属于葡萄糖氧化酶提取技术领域，特别是涉及一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法。

背景技术

葡萄糖氧化酶能够催化葡萄糖消耗氧气，产生葡萄糖酸和过氧化氢，所以它在食品行业中应用非常广泛，主要表现在以下四个方面：去除食品中残留的葡萄糖、脱氧、杀菌、测定食品中葡萄糖含量。

葡萄糖氧化酶促生长的作用机理是：在动物饲料中添加的葡萄糖氧化酶能具有抗氧化的功能，能够清除掉牲畜应激状态下在肠道上皮细胞产生的大量自由基，来保护肠道上皮细胞的完整性。

医学上尿糖试纸用来测定糖尿病人尿液中的葡萄糖含量；葡萄糖氧化酶氧速率法测定葡萄糖的准确度高、线性范围广、反应特异性强、重复性良好。

葡萄糖氧化酶(GOD)广泛分布于动物、植物及微生物体内。但由于在动植物体内含量较少，并且提取上有一定的局限性，故较少采用。

在微生物中，葡萄糖氧化酶的生产主要采用霉菌发酵法，一般采用曲霉和青霉做为生产菌种，如黑曲霉、米曲霉、青霉、乳酸克鲁维酵母和脆壁克鲁维酵母，是工业生产GOD的普遍酶原。目前，国内外均采用微生物发酵法生产葡萄糖氧化酶。由于霉菌在一定条件下产生葡萄糖氧化酶的能力强，因此，葡萄糖氧化酶的工业化生产主要采用黑曲霉(Aspergillu niger)和青霉菌(Penicilliunnotation)。但葡萄糖氧化酶几乎全部依赖于进口，生产成本也随之提高。因此，筛选产葡萄糖氧化酶酶活较高的菌株，具有重大的实际应用价值。

本发明提供一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，能够实现大批量高效提取葡萄糖氧化酶。

发明内容

本发明的目的在于提供一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，通过菌种放入斜面培养基培养并制成菌液，将菌液接种至平皿培养基长出菌落，将菌落，置于发酵罐中扩大发酵获取发酵液；将发酵液离心获取上清液并对上清液浓缩干燥获取葡萄糖氧化酶；实现了大批量高效提取葡萄糖氧化酶。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，包括：菌株培养及葡萄糖氧化酶提取；

所述菌株培养过程包括如下：

步骤一：将菌种放入斜面培养基中恒温培养产生孢子并将孢子装入液体培养瓶中，充分混匀后培养制成菌液；

步骤二：将菌液接种至平皿培养基中培养直至长出菌落；

步骤三：将菌落置于发酵罐中扩大发酵培养获取发酵液；

所述葡萄糖氧化酶提取的过程包括如下：

步骤四：将发酵液4000～8000r/min转速条件离心后获取上清液即为葡萄糖氧化酶液；

步骤五：将所述葡萄糖氧化酶液浓缩干燥得到葡萄糖氧化酶。

优选地，步骤一中菌种为黑曲霉或青霉菌；步骤一中斜面培养基培养温度为26-30℃，培养时间为4-6天；步骤一中菌液的浓度为1.5×10-3×10个·孢子/mL。