[发明专利]一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法

权利要求书

1.一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，包括：菌株培养及葡萄糖氧化酶提取；

所述菌株培养过程包括如下：

步骤一：将菌种放入斜面培养基中恒温培养产生孢子并将孢子装入液体培养瓶中，充分混匀后培养制成菌液；

步骤二：将菌液接种至平皿培养基中培养直至长出菌落；

步骤三：将菌落置于发酵罐中扩大发酵培养获取发酵液；

所述葡萄糖氧化酶提取的过程包括如下：

步骤四：将发酵液4000～8000r/min转速条件离心后获取上清液即为葡萄糖氧化酶液；

步骤五：将所述葡萄糖氧化酶液浓缩干燥得到葡萄糖氧化酶。

2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，步骤一中菌种为黑曲霉或青霉菌；步骤一中斜面培养基培养温度为26-30℃，培养时间为4-6天；步骤一中菌液的浓度为1.5×10-3×10个·孢子/mL。

3.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，步骤二中平皿培养基中培养温度为24-26℃，培养时间为3-5天；步骤二中平皿培养基有多个，培养完成后，测定各发酵液中的葡萄糖氧化酶酶活，筛选出酶活最高的菌株。

4.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，步骤三中发酵罐的罐压0.05-0.08Mpa，培养温度28-30℃，搅拌转速300r/min，pH控制6.5-7.0；通风量：0-40h为30m³/h，40-58h为45m³/h，58h-120h120h放罐为40m³/h；当pH升至7.0时，开始补料，控制pH在6.5-7.0。

5.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，步骤四中在0～5℃离心10～15min，得到的上清液即为葡萄糖氧化酶液。

6.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，步骤五中浓缩温度为25-35℃。

7.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶的工业发酵提取方法，其特征在于，

所述斜面培养基的营养成份为：葡萄糖20％，蛋白胨25％，(NH4)₂SO4 5％，K₂HPO₄ 1％，MgSO₄·7H₂O 0.5％，pH 7.0；

所述平皿培养基的营养成份为：葡萄糖40％，蛋白胨30％，(NH₄)₂SO₄7.5％，K₂HPO₄1.5％，MgSO₄·7H₂O 0.5％，pH 7.2；

所述发酵罐中的营养成份为：葡萄糖50％，蔗糖10％，玉米浆10％，(NH₄)₂SO₄ 7.5％，K₂HPO₄ 1.5％，MgSO₄·7H-O 0.5％，氯化钙0.5％，pH 7.2。