[发明专利]同时展示EV71病毒和CVA16病毒中和抗原表位的重组腺病毒

说明书

本发明提供了一种能同时展示EV71病毒和CVA16病毒中和抗原表位的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒的六邻体HVR1区插入有EV71病毒SP70中和抗原表位基因，所述重组腺病毒的六邻体HVR2区插入有CVA16病毒PEP55中和抗原表位基因。本发明还提供了该重组腺病毒的制备方法。本发明的重组腺病毒能够诱导机体产生有效的EV71病毒和CVA16病毒的中和抗体，从而预防由EV71病毒和CVA16病毒引起的手足口病。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及同时展示EV71病毒和CVA16病毒中和抗原表位的重组腺病毒疫苗，以及该重组腺病毒疫苗的制备方法。

背景技术

EV71病毒(肠道病毒71型)和CVA16病毒(柯萨奇病毒A组16型)是引起手足口病主要的病原体，每年均能引起手足口病疫情流行，给东南亚地区带来较大的社会负担。其中EV71病毒危害性最大，能够引起神经性重症，比如无菌性脑膜炎、神经原性肺水肿、脊髓灰质炎样麻痹、脑干脑炎等，严重时可导致病人死亡。CVA16病毒危害性也比较大，常导致较为严重的手足口症状，需要住院治疗。目前EV71病毒和CVA16病毒尚无有效的药物可以治疗，临床医生一般是采取对症治疗的方式，因此开发一种有效的疫苗显得尤为重要。EV71病毒灭活疫苗2015年已经获得中国药监局的批准上市，但是CVA16病毒的疫苗还在临床研究阶段。要想有效预防和控制手足口病流行，单独预防控制EV71病毒的流行是不够的，因此本项目计划采用腺病毒载体展示技术，构建一种能够同时展示EV71病毒和CVA16病毒中和抗原表位的重组腺病毒疫苗，能够同时预防EV71病毒和CVA16病毒。

腺病毒是一个二十面体对称结构的病毒颗粒，病毒的外壳是由252个壳体亚单位组成，其中六邻体占据240个，是最主要的外壳蛋白。六邻体能够刺激机体产生中和抗体，是腺病毒最重要的中和抗原。腺病毒六邻体上存在着区别型特异性中和抗体的高变区，这些高变区包括E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7。基本高变区都位于腺病毒外壳，可以诱导产生强烈的中和抗体。而且高变区的基因存在极大的突变几率，在高变区内插入外源的基因一般不会改变腺病毒的结构特性和病毒活性。因此，在不影响腺病毒的病毒特性(复制性、感染性、稳定性)的情况下，可以在腺病毒的高变区插入EV71病毒和CVA16病毒的中和抗原基因。

目前已经发现EV71和CVA16病毒的多个中和性抗原表位，如EV71病毒的VP1蛋白的163-177位氨基酸(SP55)和208-222位氨基酸(SP70)、VP2蛋白的136-150位氨基酸(VP2-28)，其中208-222位氨基酸为型特异性；CVA16病毒的多个中和表位，94-108位氨基酸(PEP32)、109-123位氨基酸(PEP37)、163-177位氨基酸(PEP55)、187-201位氨基酸(PEP63)、211-225位氨基酸(PEP71)、271-285位氨基酸(PEP91)。

发明内容

本发明的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种能够同时诱导机体产生有效的EV71病毒和CVA16病毒的中和抗体的重组疫苗。

为了实现以上目的，本发明提供了一种同时展示EV71病毒和CVA16病毒中和抗原表位的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒的六邻体HVR1区插入有EV71病毒SP70中和抗原表位基因，所述重组腺病毒的六邻体HVR2区插入有CVA16病毒PEP55中和抗原表位基因。

优选地，根据本发明所述的重组腺病毒是3型腺病毒，特别是人3型腺病毒，更优选是E3区缺陷的3型腺病毒，特别是E3区缺陷的人3型腺病毒。

术语“E3区缺陷的3型腺病毒”意指3型腺病毒E3区大部分基因(即腺病毒非必需E3区nt 27,737–30,900)被去除，被置换为CMV-EGFP基因。

在另一方面，本发明还提供了制备所述重组腺病毒的方法，该方法包括如下步骤：