[发明专利]水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法及其试剂盒，属于分子标记技术领域，包括利用特异性引物B3InDel7F、B3InDel7R，对水稻基因组DNA进行PCR扩增，如果扩增获得了目的基因片段，则表明抗褐飞虱基因Bph3基因存在。该方法与现有技术相比，可直接通过电泳判断目标材料的基因型，方便快捷准确率高，可分辨目标材料是杂合还是纯合，准确率达100%；通过检测抗褐飞虱基因位点，可以在苗期就进行基因筛选，鉴定出含抗褐飞虱基因Bph3的单株，淘汰其它植株，大大节约了鉴定成本，缩短水稻品种的育种周期，从而加快育种进程。

技术领域

本发明涉及的是农作物分子遗传育种学领域，尤其涉及的是一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法及其试剂盒。

背景技术

褐飞虱是一种世界性的水稻害虫，也是亚洲地区危害最严重的害虫之一，长期以来，在减轻褐飞虱对水稻危害方面主要是使用化学杀虫剂来进行防治。然而，化学杀虫剂的过度使用不仅会杀死大量褐飞虱的天敌，甚至会刺激褐飞虱产卵最终导致褐飞虱更加猖獗；同时也会严重污染环境，导致稻谷中农药残留，严重影响稻米品质。因此，利用褐飞虱抗性基因来选育水稻广谱抗虫性品种被认为是控制褐飞虱危害的最安全、有效的方法。

水稻分子标记辅助选育抗虫品种的培育关键在于利用较好的抗性基因来源。2014年Liu等从斯里兰卡当地籼稻品种RH（Rathu heenati）中成功克隆了Bph3基因，该基因同时抗褐飞虱生物型I、II、III和IV，是目前为止抗性最广的抗褐飞虱基因，基因组测序发现水稻品种IR72含有该抗性基因。单纯的常规育种手段选育含抗褐飞虱基因的水稻品种程序繁琐、效率较低，选择难度较大，将分子标记辅助选择育种与常规育种结合可显著提高抗性育种的效率。

基因特异性分子标记是分子标记辅助育种中理想的分子标记类型，是基于目标基因内部DNA序列多态性开发的标记，与目标基因共分离，不受遗传背景影响，与生物表型性状高度相关。目前可供利用的Bph3基因内特异性分子标记数量甚少，因此开发Bph3特异性分子标记，通过分子标记辅助选择将Bph3基因导入到水稻品种中，对于选育具有广谱抗性的水稻品种具有重大的育种价值。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法及其试剂盒，解决目前可供利用的Bph3特异性分子标记数量较少的问题，提供一种新的简便易行且扩增效率高的分子标记方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法，包括以下步骤：

（1）提取待测水稻基因组DNA；

（2）利用特异性引物，对水稻基因组DNA进行PCR扩增，所述特异性引物序列为：

B3InDel7F ：5’-TATCAAGGTGCCAAAGAGC-3’，

B3InDel7R ：5’-ATCACAGAGCCTCCGAGAA-3’；

（3）检测PCR扩增产物，如果扩增获得了目的基因片段，则表明抗褐飞虱基因Bph3基因存在。

进一步优选地，所述PCR扩增反应体系，以10µL计，包括：10×PCR反应缓冲液1µL，25mM MgCl₂ 0.6µL，10mM dNTP 0.8µL，25mM引物F和R各1µL，DNA 20ng，Taq DNA聚合酶0.25µL，加ddH₂O补足至10µL。