[发明专利]水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测水稻基因组DNA；

（2）利用特异性引物，对水稻基因组DNA进行PCR扩增，所述特异性引物的序列为：

B3InDel7F ：5’-TATCAAGGTGCCAAAGAGC-3’，

B3InDel7R ：5’-ATCACAGAGCCTCCGAGAA-3’；

（3）检测PCR扩增产物，如果扩增获得了目的基因片段，长度为117bp，则表明抗褐飞虱基因Bph3基因存在。

2.根据权利要求1所述的一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系，以10µL计，包括：10×PCR反应缓冲液1µL，25mM MgCl₂ 0.6µL，10mMdNTP 0.8µL，25mM引物F和R各1µL，DNA 20ng，Taq DNA聚合酶0.25µL，加ddH₂O补足至10µL。

3.根据权利要求1所述的一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性2min；94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，共30个循环，再72℃继续延伸8min，获得PCR扩增产物。

4.根据权利要求1所述的一种水稻抗褐飞虱基因Bph3的分子标记方法，其特征在于，所述检测PCR扩增产物的方法包括琼脂糖凝胶电泳检测或聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

5.一种用于检测水稻抗褐飞虱基因Bph3的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下特异性扩增引物：

B3InDel7F ：5’-TATCAAGGTGCCAAAGAGC-3’，

B3InDel7R ：5’-ATCACAGAGCCTCCGAGAA-3’。

6.根据权利要求5所述的一种用于检测水稻抗褐飞虱基因Bph3的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR扩增反应试剂，所述PCR扩增反应试剂包括：dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液。

7.根据权利要求5所述的一种用于检测水稻抗褐飞虱基因Bph3的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板，所述标准阳性模板为含有水稻抗褐飞虱基因Bph3的DNA样品。