[发明专利]重组溶瘤病毒以及制备方法、应用和药物

说明书

本发明公开了重组溶瘤病毒以及制备方法、应用和药物，涉及生物技术领域。本发明公开的重组溶瘤病毒的基因组序列上含有如下外源元件：(1)含有第一启动子和第一干扰RNA表达序列的第一表达盒；(2)靶标序列；以及(3)第二表达盒。该重组溶瘤病毒的繁殖或复制受到其基因组序列上所插入的外源元件调控，通过这些外源元件的调控，使得该重组溶瘤病毒可以在不同类型的细胞中选择性繁殖或复制，通过选择性的繁殖或复制进而可选择性地杀死第二细胞即靶细胞(例如肿瘤细胞)而对第一细胞即非靶细胞(例如正常细胞)不造成伤害。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种重组溶瘤病毒以及制备方法、应用和药物。

背景技术

癌症已经成为威胁人类健康的主要杀手。《2015全球癌症统计》数据显示：2015年全球新增病例约1410万例，死亡人数达820万。2015年中国新发癌症病例429万人和死亡病例达281万人。目前治疗癌症主要靠传统的手术切除，放疗和化疗。手术切除一定程度上能解除患者痛苦，但对于位于体内深部的癌症无以为助，并对已扩散的肿瘤更是无能为力。放疗和化疗在临床上已使用多年，但因无选择性副作用大且存在着大剂量致死性的潜在风险。近年来尤其在过去的五年，抗体和CAR T在治疗癌症方面的潜力和应用越来越受到关注。抗体治疗能缓解癌症病情发展，但普遍治疗效果欠佳，现广泛认为抗体治疗更适宜做辅助治疗。CAR T治疗精准靶向且有可能彻底根除癌症，但CAR T治疗主要适合血癌，且一个治疗方案只适合一个给定的病人，因此治疗费用对一般癌症患者高不可及，更大的问题是CART治疗一旦脱靶，将置病人于死地。为了安全高效治疗癌症和减少癌症患者的痛苦，用全新的策略开发新药物是势在必行。在多项可能的选择中，遗传工程改造溶瘤病毒治疗癌症显得尤为有吸引力因为溶瘤病毒治疗无耐药性，安全且有效。

病毒感染延缓肿瘤增大或让肿瘤消失早在100年前已有临床观察，随后人们甚至用乙肝病人血浆或乙肝病人血浆提取物来治疗霍奇金病。但人们并不认为病毒是治疗癌症的可行性选择因为无法让病毒仅在癌细胞中生长和繁殖。20世纪90年代，分子生物学技术的进步为遗传工程改造病毒使其拥有癌细胞特异的趋向性铺平了道路。早期研究主要发展繁殖缺陷型裂解病毒(病毒感染后，在细胞中繁殖杀死细胞，从杀死的细胞中释放出来并感染临近细胞。比如腺病毒，新城疫病毒和疱疹病毒)和繁殖缺陷型非裂解病毒(比如腺病毒相关病毒及慢病毒)表达免疫分子(GMCSF，IL-12，IL-17)或免疫反应刺激因子(TNFα，IFNα)通过增强免疫反应来治疗癌症。由于基于病毒的免疫疗法像传统的免疫治疗一样，临床效果普遍欠佳，认为应主要作为辅助治疗。为了增强病毒在癌症治疗上的作用，近年来的研究主要是关注于利用遗传工程改造裂解病毒使其选择性地在癌细胞中繁殖(溶瘤病毒)通过瘤内注射让其在原灶肿瘤细胞中繁殖杀死癌细胞(溶瘤性)并通过裂解的癌细胞碎片次生引发癌症特异的免疫反应杀灭已扩散的癌细胞从而达到治疗癌症的目的。由于溶瘤病毒安全并且一个溶瘤病毒拥有治疗多种癌症的潜力，溶瘤病毒在治疗癌症方面的应用前景值得预期。美国，欧盟及澳大利亚于2015和2016年先后批准临床使用美国Amgen公司的基于I型疱疹病毒的溶瘤病毒Tvec治疗黑色素瘤开创了溶瘤病毒在治疗癌症方面的新纪元。随后溶瘤病毒研发如火如荼，仅2017年全世界就有多达80个用溶瘤病毒治疗各种癌症的临床测试。多种溶瘤病毒在单一动物模型上都有不错的表现，但在临床上虽然安全但普遍响应率和治愈率远不理想。

发明内容

本发明的目的包括但不限于提供一种新的重组溶瘤病毒、用于制备该病毒的核酸序列和方法、该重组溶瘤病毒在癌症治疗方面的相关应用以及含有该重组溶瘤病毒的药物等。该重组溶瘤病毒的繁殖或复制受到其基因组序列上所插入的外源元件调控，通过这些外源元件的调控，使得该重组溶瘤病毒可以在不同类型的细胞中选择性繁殖或复制，通过选择性的繁殖或复制进而可选择性地杀死靶细胞(如肿瘤细胞)而对非靶细胞(例如正常细胞)不造成伤害。

本发明是这样实现的：