[发明专利]功能基化红细胞膜的制备方法

说明书

本发明公开了一种功能基化红细胞膜的制备方法，是一种红细胞膜载体功能化新方法。通过将本身没有生物活性的多肽‑磷脂偶联物，采取脂质插入的策略修饰在红细胞膜上，即得到功能基化的红细胞膜。该自由状态的多肽本身不具备生物活性，利用红细胞膜表面磷脂的流动性、多肽两头磷脂插入红细胞膜限制多肽的自由转动，使多肽在红细胞膜表面处于最恰当的跨度来形成正确的构象，从而赋予多肽特殊的功能，成功构建了具有靶向性的功能基化红细胞膜。本发明方法丰富了红细胞膜配体修饰种类以及应用领域，合成方法简单，靶向效果明显。

技术领域

本发明涉及一种生物材料的修饰方法，特别是涉及一种红细胞膜载体的修饰方法，应用于生物仿生纳米医药技术领域。

背景技术

红细胞作为一种天然的氧气运输载体，在纳米医药领域有较为广泛的应用，作为自体细胞，红细胞具有良好的生物相容性，抗免疫能力，这与其表面的跨膜蛋白有着密切的关系，去除细胞内含物，即得到红细胞膜载体，红细胞膜载体继承了天然红细胞的性质，可用于包覆纳米材料，在生物医药领域有着较为广泛的应用。

红细胞膜载体应用于纳米医药领域，对其进行功能化修饰具有重要意义。迄今为止的研究中，研究者们利用脂质插入的策略进行红细胞膜表面配体修饰，使用的靶向配体大多数都是本身具有功能的，但它们种类较少，因此，如何通过对红细胞膜载体的修饰，使其处于恰当的构象从而赋予其生物医学功能，成为急需解决的技术问题。

发明内容

为了解决现有技术问题，本发明的目的在于克服已有技术存在的不足，提供一种功能基化红细胞膜的制备方法，赋予红细胞膜新的功能，能够为红细胞膜载体功能化修饰提供新的策略，将本身不具备功能的多肽修饰到红细胞膜载体上，通过两头磷脂插入到红细胞膜表面来限制多肽的自由转动，使其处于恰当的构象从而赋予其功能。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种功能基化红细胞膜的制备方法，将多肽两端同时偶联上磷脂，合成多肽-磷脂偶联物；然后将多肽-磷脂偶联物与红细胞膜混合，制备得到功能基化红细胞膜，使所述多肽-磷脂偶联物通过两端磷脂插入到红细胞膜表面，来限制多肽的自由转动，使多肽处于设定的构象，从而赋予功能基化红细胞膜形成具有主动靶向功能的载体囊泡结构。

优选上述使多肽处于设定的构象为，使多肽在红细胞膜表面处于相应的跨度来形成设定的构象。

作为本发明优选的技术方案，功能基化红细胞膜的制备方法，步骤包括：先将磷脂去盐酸化，然后通过置换反应和偶联反应，制备形成磷脂-多肽-磷脂结构的多肽-磷脂偶联物；然后将合成的多肽-磷脂偶联物与红细胞膜混合，放置摇床孵育，利用磷脂的流动性，使多肽-磷脂偶联物与红细胞膜融合，制备得到功能基化红细胞膜，所述多肽-磷脂偶联物通过两头磷脂插入到红细胞膜表面，来限制多肽的自由转动，使多肽处于设定的构象，从而赋予功能基化红细胞膜形成具有主动靶向功能的载体囊泡结构。

作为本发明优选的技术方案，功能基化红细胞膜的制备方法，包括如下步骤：

a.多肽-磷脂偶联物的合成：

按照磷脂、氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯和多肽的摩尔比为2：2：1的比例，或者按照未进行脱盐处理的磷脂、氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯和多肽的质量比为60：26：75的比例，并按照三氯甲烷、无水甲醇和去离子水体积比为65：35：8的比例，用三乙胺，将磷脂进行脱盐处理，得到去盐酸化的磷脂，然后将去盐酸化的磷脂和氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯进行混合，并加入到三氯甲烷中，使混合反应物进行搅拌反应至少3天，在反应结束后，向产物混合液中加入无水甲醇和去离子水，并称多肽加入产物混合液，得到混合液体系，然后使混合液体系在氮气保护条件下，在进行反应至少3天，然后对反应产物进行旋蒸、冻干，从而得到白色粉末状多肽-磷脂偶联物；优选上述多肽序列为CSAWYGTLYEYDGC或CGSTIYASYYESGHGC；

b.红细胞膜载体的制备：