[发明专利]功能基化红细胞膜的制备方法

权利要求书

1.一种功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：将多肽两端同时偶联上磷脂，合成多肽-磷脂偶联物；然后将多肽-磷脂偶联物与红细胞膜混合，制备得到功能基化红细胞膜，使所述多肽-磷脂偶联物通过两端磷脂插入到红细胞膜表面，来限制多肽的自由转动，使多肽处于设定的构象，从而赋予功能基化红细胞膜形成具有主动靶向功能的载体囊泡结构；所述多肽序列为CSAWYGTLYEYDGC或CGSTIYASYYESGHGC。

2.根据权利要求1所述功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：所述使多肽处于设定的构象为，使多肽在红细胞膜表面处于相应的跨度来形成设定的构象。

3.根据权利要求1所述功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：先将磷脂去盐酸化，然后通过置换反应和偶联反应，制备形成磷脂-多肽-磷脂结构的多肽-磷脂偶联物；然后将合成的多肽-磷脂偶联物与红细胞膜混合，放置摇床孵育，利用磷脂的流动性，使多肽-磷脂偶联物与红细胞膜融合，制备得到功能基化红细胞膜，所述多肽-磷脂偶联物通过两头磷脂插入到红细胞膜表面，来限制多肽的自由转动，使多肽处于设定的构象，从而赋予功能基化红细胞膜形成具有主动靶向功能的载体囊泡结构。

4.根据权利要求3所述功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

a.多肽-磷脂偶联物的合成：

按照未进行脱盐处理的磷脂、氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯和多肽的质量比为60：26：75的比例，并按照三氯甲烷、无水甲醇和去离子水体积比为65：35：8的比例，用三乙胺，将磷脂进行脱盐处理，得到去盐酸化的磷脂，然后将去盐酸化的磷脂和氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯进行混合，并加入到三氯甲烷中，使混合反应物进行搅拌反应至少3天，在反应结束后，向产物混合液中加入无水甲醇和去离子水，并称多肽加入产物混合液，得到混合液体系，然后使混合液体系在氮气保护条件下，在进行反应至少3天，然后对反应产物进行旋蒸、冻干，从而得到白色粉末状多肽-磷脂偶联物；

b.红细胞膜载体的制备：

将全血经过离心、洗涤、低渗、超声以及过膜处理后，而得到红细胞膜载体；

c.功能基化红细胞膜的组装制备：

将在所述步骤b中制备的红细胞膜以及在所述步骤a中制备的多肽-磷脂偶联物进行混合，放入摇床进行孵育，而得到功能基化红细胞膜。

5.根据权利要求4所述功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：在所述步骤a中，用50μL的三乙胺，将12mg的磷脂进行脱盐处理，得到去盐酸化的磷脂，然后将去盐酸化的磷脂和5.2mg的氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯进行混合，并加入到2.6mL的三氯甲烷中，使混合反应物进行搅拌反应至少3天，在反应结束后，向产物混合液中加入1.4mL无水甲醇和320μL去离子水，并称15mg的多肽加入产物混合液，得到混合液体系，然后使混合液体系在氮气保护条件下，在进行反应至少3天，然后对反应产物进行旋蒸、冻干，从而得到白色粉末状多肽-磷脂偶联物。

6.根据权利要求4所述功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：在所述步骤b中，取全血在4～8℃，800×g转速下离心得到红细胞，用10mM且pH为7.4的PBS洗涤至少3次，再按照红细胞与2.5mM的PBS低渗溶液的体积比为1：40的比例，机械能低渗处理，去除红细胞内含物，在3000×g转速下进行离心洗涤，得到红细胞囊泡；然后在功率不低于100W，频率不低于40KHz下进行超声至少10min后，最后挤压过400nm膜10次，200nm膜10次，即得到尺寸均匀的红细胞膜载体。

7.根据权利要求4所述功能基化红细胞膜的制备方法，其特征在于：在所述步骤c中，取30μL红细胞膜和1mg多肽-磷脂偶联物混合于1mL的10mM且pH为7.4PBS中，在不高于37℃下进行孵育至少30min，从而得到功能化的红细胞膜。