[发明专利]基于18F-FDG检测红细胞吞噬及体内分布的方法

说明书

本发明提供了基于18F‑FDG的检测红细胞吞噬的方法，为检测红细胞吞噬率提供了一种新方法，18F‑FDG被吸收入红细胞内，不改变红细胞表面分子状态，更能反应真实情况下红细胞的吞噬状况。本发明还提供了基于18F‑FDG的检测红细胞体内分布的方法，可同时体外体内观察标记红细胞被吞噬，以明确输血是否有效，为辅助诊断红细胞输注无效提供了直观的证据。

技术领域

本发明属于红细胞吞噬及体内分布检测领域，具体涉及基于18F-FDG检测红细胞吞噬的方法，本发明还涉及基于18F-FDG检测红细胞体内分布的方法。

背景技术

人红细胞在血液循环中的寿命约120天。红细胞在循环过程中受到氧化应激、胆红素和细胞因子等刺激而逐渐受损、衰老，自身结构和组成也随之发生变化。衰亡红细胞膜表面分子发生变构或聚集，从而暴露相应抗原决定簇而被巨噬细胞识别、吞噬。通过检测红细胞吞噬率可评估红细胞表面是否吸附抗体或者在体内发生病理性变化，从而一定程度上辅助诊断及解释临床上出现的不明原因的贫血和溶血。输血作为临床常用补充红细胞数目手段对维持患者正常血容量和氧供给具有重要意义，而红细胞输注无效是常见的输血不良反应。因此，追踪输注红细胞在体内器官的分布，尤其是在肝脾的聚集程度，对判断红细胞输注无效的原因具有重要意义。

检测红细胞吞噬的方法主要分为两大类，一类是基于光学显微镜的原始计数方法，通过瑞氏染色或荧光染色计数巨噬细胞内的红细胞数，计算吞噬率和吞噬指数；瑞氏染色是当巨噬细胞吞噬完红细胞后通过巨噬细胞和红细胞嗜酸嗜碱性的差异区分巨噬细胞与红细胞；荧光染色是将红细胞先进行荧光标记再与巨噬细胞孵育，吞噬结束后通过荧光显微镜观察巨噬细胞内荧光标记的红细胞。另一类是基于流式细胞术检测吞噬率，分别用流式抗体标记巨噬细胞和红细胞或者单标红细胞，通过检测巨噬细胞内荧光的表达强度推测红细胞吞噬情况。目前标记红细胞的标记物主要分为两大类，一类是通过与红细胞膜上特异性抗原结合来标记红细胞，如小鼠红细胞膜上Ter119，人红细胞上CD235a。另一类是插入到红细胞膜上的非特异性物质，如pkh26，pkh26插入细胞膜上的脂肪链中极易引起红细胞膜僵化而使红细胞变形。

检测细胞在体内的分布情况目前主要采用生物发光或者离体细胞分离检测的方法。目前应用于体内成像的方法主要是近红外染料染色、生物发光等方式，但这些方法由于毒性作用或敏感性不高尚未应用于临床。而18F-FDG已成熟应用于临床，敏感性强且毒性低的显像剂。将荧光素酶或近红外染料标记的细胞注入小鼠体内通过生物发光以检测细胞分布，但此方法尚未应用于红细胞分布检测。离体细胞分离检测红细胞分布是指注射标记红细胞后一段时间处死小鼠立即收集各器官细胞比较标记物强度来推测红细胞分布，此方法属于间接方法不能直观体现细胞在体内的分布，且无法应用于临床。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供基于18F-FDG检测红细胞吞噬的方法，体外检测红细胞吞噬时将18F-FDG标记的红细胞与巨噬细胞孵育，去除未吞噬红细胞后，收集巨噬细胞，将采用放免仪检测巨噬细胞的的放射性，反映红细胞被吞噬的情况，巨噬细胞的放射性越强则表示被吞噬的红细胞越多。与其他标记红细胞体外检测吞噬的方法相比，采用18F-FDG检测体外红细胞吞噬具有更高的灵敏度，当细胞数目较少时也可检测出放射性。

包括如下步骤：

(1)制作红细胞悬液；

(2)调整18F-FDG标记液渗透压；

(3)18F-FDG标记红细胞；

(4)提前将5×10⁵个巨噬细胞种至24孔板中，每孔中加500ul完全1640 培基；

(5)取10ul步骤(3)中标记过的红细胞至90ul完全1640培基中，混匀得到红细胞悬液，并取10ul上述红细胞悬液加至24孔板的一个孔中，混匀，在细胞培养箱中孵育2小时；