[发明专利]皂苷元内酯的制备方法

说明书

本发明公开了一种皂苷元内酯的制备方法，包括如下步骤：(1)将苦丁茶冬青皂苷D溶于有机溶剂中形成样品溶液；(2)制备肠道菌孵育液；(3)将样品溶液与肠道菌孵育液混合均匀后得混合液，将混合液置于厌氧环境中恒温振荡培育20～150h，培育后的混合液加入萃取溶剂进行萃取，萃取后取上清液，然后除去萃取溶剂得到残渣，将残渣溶于甲醇中得到醇溶液；(4)将醇溶液通过反相液相色谱柱分离，收集皂苷元α‑苦丁内酯流出时间段内的流出液，将收集的流出液浓缩得皂苷元α‑苦丁内酯。本发明能够从苦丁茶冬青皂苷D中制备皂苷元α‑苦丁内酯。

技术领域

本发明涉及一种苦丁皂苷元内酯的制备方法。

背景技术

苦丁茶冬青为冬青科植物苦丁茶冬青的叶，有清热解暑功效，用于暑月外感风寒，内伤生冷而致恶寒发热，头痛脘痞，呕恶泄泻等症。近年来，有人对苦丁茶冬青叶的化学成分和药理作用进行了深入研究。研究表明，苦丁茶冬青中的主要成分有酚类、五环三萜皂苷和三萜等，五环三萜内酯为苦丁茶皂苷元。实验证明，苦丁茶冬青中皂苷具有改善心血管系统、降血脂、降血压、降血糖和提高免疫力方面的功能，其在体内发挥活性的形式可能是苦丁茶皂苷元α-苦丁内酯、β-苦丁内酯和γ-苦丁内酯。

CN101775061A公开了一组苦丁茶皂苷类化合物，其中公开了苦丁酮A，B，D，E，F和G，上述苦丁酮均通过苦丁茶有机溶剂萃取分离获得。CN104402965A公开了一种从苦丁茶冬青中分离苦丁苷A和苦丁苷D的方法，该方法通过有机溶剂萃取和液相色谱分离的方法分别获得苦丁苷A和苦丁苷D，但是苦丁苷A和苦丁苷D均为五环三萜皂苷。CN102600214A公开了一种苦丁茶冬青叶的提取方法、总皂苷及用途，所述提取方法制备的是苦丁茶总皂苷及其单体化合物。

发明内容

有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种皂苷元内酯的制备方法，从苦丁茶冬青中提取了苦丁茶皂苷在体内的真正活性成分皂苷元α-苦丁内酯。

本发明采用如下技术方案实现上述目的。

本发明提供一种皂苷元内酯的制备方法，所述的皂苷元内酯为皂苷元α-苦丁内酯，包括如下步骤：

(1)将苦丁茶冬青皂苷D溶于有机溶剂中形成样品溶液；

(2)制备肠道菌孵育液；

(3)将样品溶液与肠道菌孵育液混合均匀后得混合液，将混合液置于厌氧环境中恒温振荡培育20～150h，培育后的混合液加入萃取溶剂进行萃取，萃取后取上清液，然后除去萃取溶剂得到残渣，将残渣溶于甲醇中，得到醇溶液；

(4)将醇溶液通过反相液相色谱柱分离，收集皂苷元α-苦丁内酯流出时间段内的流出液，将收集的流出液浓缩得皂苷元α-苦丁内酯。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(1)中，将苦丁茶冬青皂苷D溶于二甲基亚砜中，再加入无菌水得到样品溶液；其中，样品溶液中的苦丁茶冬青皂苷D的浓度为1～6mg/mL。

根据本发明的制备方法，优选地，步骤(2)中，制备肠道菌孵育液包括以下步骤：

(a)制备灭菌厌氧培养基；

(b)取粪便与生理盐水混合均匀制成混悬液，所述混悬液中粪便与生理盐水的配比为1mg:2～6mL；

(c)取混悬液沉淀后的上清液，加入灭菌厌氧培养基混匀，然后将混合液恒温振荡厌氧培养15～35h，得到肠道菌孵育液；其中，上清液与灭菌厌氧培养基的体积比为1:6～12。

根据本发明的制备方法，优选地，还包括如下步骤：

(d)将步骤(c)制备的肠道菌孵育液经过分离和鉴定，分离出肠球菌孵育液或拟杆菌孵育液作为步骤(2)中的肠道菌孵育液。