[发明专利]皂苷元内酯的制备方法

权利要求书

1.一种皂苷元内酯的制备方法，所述的皂苷元内酯为皂苷元α-苦丁内酯，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将苦丁茶冬青皂苷D溶于有机溶剂中形成样品溶液；

(2)制备肠道菌孵育液；制备肠道菌孵育液包括以下步骤：

(a)制备灭菌厌氧培养基；

(b)取粪便与生理盐水混合均匀制成混悬液，所述混悬液中粪便与生理盐水的配比为1mg:2～6mL；

(c)取混悬液沉淀后的上清液，加入灭菌厌氧培养基混匀，然后将混合液恒温振荡厌氧培养15～35h，得到肠道菌孵育液；其中，上清液与灭菌厌氧培养基的体积比为1:6～12；

(d)将步骤(c)制备的肠道菌孵育液经过分离和鉴定，分离出肠球菌孵育液或拟杆菌孵育液作为步骤(2)中的肠道菌孵育液；

(3)将样品溶液与肠道菌孵育液混合均匀后得混合液，将混合液置于厌氧环境中恒温振荡培育20～150h，培育后的混合液加入萃取溶剂进行萃取，萃取后取上清液，然后除去萃取溶剂得到残渣，将残渣溶于甲醇中，得到醇溶液；

(4)将醇溶液通过反相液相色谱柱分离，收集皂苷元α-苦丁内酯流出时间段内的流出液，将收集的流出液浓缩得皂苷元α-苦丁内酯。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将苦丁茶冬青皂苷D溶于二甲基亚砜中，再加入无菌水得到样品溶液；其中，样品溶液中的苦丁茶冬青皂苷D的浓度为1～6mg/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(c)中，所述混悬液经离心沉淀处理，处理时间为5～15min，离心频率为2000～6000rpm；所述混合液在36～38℃下恒温振荡，振荡频率为100～200rpm。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，样品溶液与肠道菌孵育液的体积比为1:1～20；萃取溶剂为乙酸乙酯-水饱和正丁醇的混合溶剂，混合液与乙酸乙酯-水饱和正丁醇的混合溶剂的体积比为1:0.2～10；乙酸乙酯-水饱和正丁醇的混合溶剂中，乙酸乙酯与水饱和正丁醇的体积比为1:0.5～2。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述混合液于36～38℃下恒温振荡培育，振荡频率为100～300rpm；萃取时进行蜗旋和离心处理，蜗旋1～10min，离心处理为1～20min，离心频率为2000～20000rpm。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：将步骤(3)获得的醇溶液进行离心处理，处理时间为1～20min，处理频率为2000～20000rpm，再通过0.2～0.5μm的滤膜过滤，然后通过反相液相色谱柱分离。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，反相液相色谱柱为C18色谱柱，冲洗液为浓度70～85vol％的甲醇水溶液。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，皂苷元α-苦丁内酯流出时间段为15～18min。