[发明专利]软骨糖蛋白的高效拆分方法

说明书

本发明公开了一种软骨糖蛋白的高效拆分方法，包括以下步骤：步骤一、向软骨组织中加入蒸馏水并置于热压罐中进行热压拆分，得到软骨液化液；步骤二、向软骨液化液中加入胰蛋白酶进行一次酶解，然后加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，得到酶解液；步骤三、将酶解液进行分离，分别得到软骨多糖和软骨肽；软骨液化液的制备方法为：将软骨组织和蒸馏水置于热压罐中，然后在0.07～0.1MPa、110～120℃条件下热压拆分0.5～2.5h，置于1000～1500rpm条件下均质10～20s，即得到软骨液化液。本发明通过在酶解拆分前使用热压拆分处理，不仅能够将软骨糖蛋白完全拆分，而且在工艺中可有效避免强碱的使用。

技术领域

本发明涉及骨加工技术领域。更具体地说，本发明涉及一种软骨糖蛋白的高效拆分方法。

背景技术

动物软骨的主要成分是蛋白质和碳水化合物。研究表明软骨中的碳水化合物主要是粘多糖即硫酸软骨素，蛋白质主要是Ⅱ型胶原蛋白。软骨多糖是常见的天然酸性粘多糖，白色或微黄色粉末，易溶于水，不溶于乙醇。软骨多糖作为一种常见的保健品和美容产品的原料，可以辅助治疗关节痛、神经性头疼、三叉神经痛、动脉硬化等症，在医学领域和食品领域有着广泛的应用。我国是软骨多糖的生产大国，超过世界产量的80％都是由中国提供。Ⅱ型胶原蛋白由3条相同的肽链构成，形成一种3股螺旋结构，富含羟脯氨酸和羟赖氨酸，也有较多脯氨酸和赖氨酸，相对分子量在95～100kDa之间。Ⅱ型胶原蛋白广泛应用于医药、精细化工、食品领域。研究表明鸡胸软骨寡肽(肽分子量<1kDa)具有很好的抗骨质疏松作用。口服Ⅱ型胶原蛋白使机体产生免疫耐受可以抑制风湿性关节炎的发病。采用Ⅱ型胶原蛋白作为膳食补充剂可以抑制类风湿性关节炎，维护骨骼健康。

传统软骨多糖的制备主要以鲨鱼软骨、猪、牛的喉、鼻、气管等软骨为原料，经过酶解、树脂吸附、乙醇沉淀等工艺制得粗品，但是在软骨多糖的制备工艺中需要使用强碱进行处理，造成大量的工业废水，严重污染环境。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种软骨糖蛋白的高效拆分方法，其通过在酶解拆分前使用热压拆分进行处理，不仅能够将软骨糖蛋白完全拆分，而且在工艺中可有效避免强碱的使用。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种软骨糖蛋白的高效拆分方法，包括以下步骤：

步骤一、向软骨组织中加入蒸馏水并置于热压罐中进行热压拆分，得到软骨液化液：

步骤二、向软骨液化液中加入胰蛋白酶进行一次酶解，然后加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，灭酶，得到酶解液；

步骤三、将酶解液进行分离，分别得到软骨多糖和软骨肽。

优选的是，步骤一中，软骨组织与蒸馏水的质量比为1:1.5～2.5。

优选的是，步骤一中，软骨液化液的制备方法为：将软骨组织和蒸馏水置于热压罐中，置于0.07～0.1MPa、110～120℃条件下热压拆分0.5～2.5h，热压拆分后，置于1000～1500rpm条件下均质10～20s，过滤，即得到软骨液化液。

优选的是，步骤二中，酶解液的制备方法为：向软骨液化液中加入胰蛋白酶，并置于50～60℃的条件下进行一次酶解，酶解1～2h，然后加入木瓜蛋白酶并置于50～60℃的条件下进行二次酶解，酶解1～2h，二次酶解结束后置于100℃的水浴中3～5min进行灭酶，其中，软骨液化液与胰蛋白酶、木瓜蛋白酶的用量比为1:0.015～0.045:0.015～0.03。

优选的是，步骤三中，将酶解液进行分离的方法为：先将酶解液使用微滤膜进行过滤，得到第一截留物和第一滤液，将第一滤液使用超滤膜进行过滤，得到第二截留物和第二滤液，将第一截留物与第二滤液合并并干燥，即得到软骨肽，将第二截留物干燥，即得到软骨多糖。