[发明专利]一种鼻咽癌组织类器官培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种鼻咽癌组织类器官培养基及培养方法，该培养基针对鼻咽癌组织来源细胞的生长特点，实现肿瘤细胞短时间内快速扩增形成类器官，并结合类器官传代技术可以在有限时间内获取足够多的类器官开展研究实验操作。本发明的培养基，可以有效的维持组织细胞特异性，组织形态也高度相似。通过本发明的方法，80％以上的鼻咽癌样本可以成功形成类器官，并且在组织病理学上类器官与原组织高度一致。

技术领域

本发明涉及类器官培养领域，进一步涉及鼻咽癌组织类器官培养领域，特别涉及一种鼻咽癌组织类器官培养基及培养方法。

背景技术

类器官(Organoids)是衍生于干细胞或前体细胞的器官特异性细胞集合。体外培养的类器官在细胞成分和组织架构上与对应器官高度相似，并具备相应的功能学特征。类器官培养是对常规细胞生物学技术的重大改革。与常规细跑培养在二维环境中培养单一细胞类群不同，类器官培养是在三维环境中培养出特定组织器官包含的多种细胞类群，其培养体系与体内微环境更为相似。因此，在各种器官生理病理的基础研究、精准医疗、药物筛选和开发、基因治疗、再生医学等方面，显示出巨大的应用前景。

鼻咽癌是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤。是我国高发恶性肿瘤之一，主要发生于我国南方五省，发病率为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。鼻咽癌的发病因素是多方面的。多年来临床观察及实验研究表明，以下因素与鼻咽癌的发生有密切关系，包括遗传因素，病毒感染，环境因素。鼻咽癌大多对放射治疗具有中度敏感性，放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法。但是对较高分化癌，病程较晚以及放疗后复发的病例，手术切除和化学药物治疗也是不可缺少的手段。另外，因为西方国家鼻咽癌的发病率很低(世界卫生组织调查报道，全球有80％的鼻咽癌患者在中国)，所有对其研究也较少，因此建立鼻咽癌类器官的培养和药物筛选体系对中国鼻咽癌患者尤其意义重大。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于鼻咽癌组织类器官的培养基和培养方法。该方法培养可操作性和重复性好，所用培养基配方价格适中。

本发明采用的技术方案如下：

一种鼻咽癌组织类器官的培养基，培养基的成分如下：氢化可的松、EGF、Insulin，ROCK抑制剂、FBS，Advanced DMEM/F12、青霉素链霉素混合液、两性霉素B。

进一步地，培养基的成分及其含量如下：氢化可的松，10ng/ml～40ng/ml；EGF，0.5ng/ml～5ng/ml；Insulin，2μg/ml～7μg/ml；ROCK抑制剂，5μM～15μM；FBS，1-10％；青霉素链霉素混合液，0.5-5x；两性霉素B，2μg/ml～5μg/ml。

进一步地，培养基的成分及其含量如下：氢化可的松，25ng/ml；EGF，2.5ng/ml；Insulin，4μg/ml；ROCK抑制剂，10μM；FBS，5％；青霉素链霉素混合液，1x；两性霉素B，3.5μg/ml。

进一步地，ROCK抑制剂为RhoA激酶抑制剂。

本发明还公开了一种鼻咽癌组织类器官培养方法，具体步骤为：将鼻咽癌组织预处理，将预处理所得细胞混合Matrigel，滴于细胞培养皿中，放置一段时间，凝固Martigel；加入培养基，进行培养。

进一步地，所述培养方法的具体步骤为：将预处理所得细胞混合Matrigel，约10000细胞每40μl胶滴，滴于6cm细胞培养皿中，放置培养皿至37℃，5％CO₂中20min，凝固Martigel；加入4.5ml培养基，置37℃，5％CO₂，细胞培养箱培养；每间隔4天更换一次培养基。

进一步地，所述鼻咽癌组织预处理步骤如下：将鼻咽癌组织使用Hank's液漂洗，在细胞培养皿中将组织剪成小块；加入组织消化液，将组织块转移至离心管内，摇床孵育消化，用细胞筛网过滤细胞，滤液加入DMEM/F12终止消化，离心，去除上清；细胞计数，置冰待用。