[发明专利]一种鼻咽癌组织类器官培养基及培养方法

权利要求书

1.一种鼻咽癌组织类器官培养基，其特征在于，培养基的成分及其含量如下：氢化可的松，10ng/ml～40ng/ml；EGF，0.5ng/ml～5ng/ml；胰岛素，2μg/ml～7μg/ml；ROCK抑制剂，5μM～15μM；FBS，1-10％；青霉素链霉素混合液，0.5-5x；两性霉素B，2μg/ml～5μg/ml；ROCK抑制剂为Y-27632二盐酸盐。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，氢化可的松，25ng/ml；EGF，2.5ng/ml；胰岛素，4μg/ml；ROCK抑制剂，10μM；FBS，5％；青霉素链霉素混合液，1x；两性霉素B，3.5μg/ml；ROCK抑制剂为Y-27632二盐酸盐。

3.一种鼻咽癌组织类器官培养方法，其特征在于，具体步骤为：将鼻咽癌组织预处理，将预处理所得细胞混合Matrigel，滴于细胞培养皿中，放置一段时间，凝固Martigel；加入权利要求1-2任一项的培养基，进行培养。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述鼻咽癌组织预处理步骤如下：将鼻咽癌组织使用Hank's液漂洗，在细胞培养皿中将组织剪成小块；加入组织消化液，将组织块转移至离心管内，摇床孵育消化，用细胞筛网过滤细胞，滤液加入DMEM/F12终止消化，离心，去除上清；细胞计数，置冰待用。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述Hank's液含有1x青霉素链霉素混合液。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述组织消化液用DMEM/F12配制，包含如下成分：胶原蛋白水解酶、中性蛋白酶、脱氧核糖核酸酶、FBS、青霉素链霉素混合液、两性霉素B。

7.一种鼻咽癌组织类器官传代培养方法，其特征在于，具体步骤为：吸掉类器官培养皿中的培养基，用Hank's液漂洗一次后加入类器官消化液消化；收集消化液及细胞，加入权利要求1-2任一项的培养基终止消化；离心，去除上清；将所得细胞与Matrigel混合继续培养；

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述Hank's液含有1x青霉素链霉素混合液。

9.根据权利要求7的方法，其特征在于，所述类器官消化液包含如下成分：胶原蛋白水解酶，中性蛋白酶，Hank's液，HEPES。