[发明专利]细胞培养基、试剂盒及细胞培养方法

权利要求书

1.一种细胞培养基，用于促进肝前体细胞的分化和成熟，其特征在于，所述细胞培养基由DMEM/12培养基、N2添加剂、B27添加剂、SB431542、DATP、Compound E、氮乙酰半胱氨酸、L-抗坏血酸、地塞米松、佛司可林和促分化成分组成；

所述促分化成分为FH1、FPH1或FPH2；

所述N2添加剂和所述B27添加剂的体积占所述基础培养基体积的1％-2％；

每1000克所述DMEM/12培养基中，所述SB431542、所述DATP和所述Compound E的总质量为7×10^-4克-3×10^-2克，所述氮乙酰半胱氨酸和所述L-抗坏血酸的总质量为3.5×10^-4克-1.1克，所述地塞米松的质量为2.3×10^-3克-5.8×10^-2克，所述佛司可林的质量为8.2×10^-4克-2.1×10^-2克，所述促分化成分的质量为1.1×10^-3克-0.15克。

2.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，所述B27添加剂占所述N2添加剂的体积百分比不大于100％。

3.根据权利要求2所述的细胞培养基，其特征在于，所述B27添加剂占所述N2添加剂的体积百分比为50％-75％。

4.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，所述SB431542与所述DATP和所述Compound E的质量和之比为3:1-5:1。

5.一种试剂盒，其特征在于，包括增殖培养基以及如权利要求1-4中任意一项所述的细胞培养基，所述增殖培养基为William's E培养基或TEM培养基。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还具有包被液，所述包被液由DMEM/12培养基和细胞外基质组成。

7.一种细胞培养方法，其特征在于，包括：

S1：提供如权利要求5所述的试剂盒，所述试剂盒包括增殖培养基和细胞培养基，将所述增殖培养基和待培养细胞悬液以2:1-4:1的体积比混合，在150倍–200倍的重力加速度下离心5-10分钟，去除上清液以得到待培养细胞沉淀液，用所述增殖培养基对所述待培养细胞沉淀液进行重悬处理后得到待培养细胞重悬液；

S2：将所述待培养细胞重悬液加入到培养位中，以使所述培养位的每平方厘米的培养面积上具有1×10⁵-2×10⁶个待培养细胞，对所述待培养细胞进行扩增处理，以得到扩增细胞；

S3：向所述扩增细胞中加入所述细胞培养基以启动分化培养，每24小时-72小时用新的所述细胞培养基进行置换处理以促进分化过程，所述分化培养的时间为6-14天。

8.根据权利要求7所述的细胞培养方法，其特征在于，还包括步骤S0，所述步骤S0中，将所述包被液加入到培养位中，在37℃下静置30-120分钟后，执行所述步骤S1。

9.根据权利要求8所述的细胞培养方法，其特征在于，所述培养位为多孔细胞培养板的每个培养孔，当所述多孔细胞培养板的孔数分别为6、12、24、48和96，对应的每个所述培养孔中的所述包被液的体积分别为500微升-700微升，150微升-200微升，80微升-120微升，40微升-80微升以及20微升-40微升。

10.根据权利要求8所述的细胞培养方法，其特征在于，所述培养位为细胞培养皿，当所述细胞培养皿的直径分别为3.5厘米、6厘米、10厘米和15厘米，对应的所述细胞培养皿中的所述包被液的体积分别为250微升-350微升，500微升-700微升，1000微升-1500微升以及2000微升-3000微升。