[发明专利]一种制备沙海蜇毒素抗毒血清的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种制备沙海蜇毒素抗毒血清的方法。对沙海蜇毒素进行减毒处理，减毒处理后沙海蜇毒素的与弗氏佐剂混合进行动物免疫，免疫后采血，制备血清后纯化，即得沙海蜇毒素抗毒血清。同时动物体内解毒实验显示该本发明制备的沙海蜇毒素抗毒血清具有效价高、纯度好和解毒效果强等特点，为沙海蜇毒素抗毒血清以及抗体的深入研究和应用奠定了重要的基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种制备沙海蜇毒素抗毒血清的方法。

背景技术

水母(jellyfish)是一种胶质状的浮游动物，主要包括四大类群：刺胞动物门的水螅水母类、管水母类、钵水母类以及栉水母门的栉水母类。水母种类繁多，分布广泛，世界上已记录的水母种类大约有1000种左右，其中我国海域已知的约有400种。

沙海蜇，又名沙蜇，或越前水母，拉丁名为Nemopilema nomurai，《中国动物志》曾同种异名Stomolophus meleagris L.Agassiz，是大型钵水母，伞径180-980mm。近年来，全球水母暴发现象逐年加重，引起了社会的广泛关注，我国亦是水母爆发重灾区之一。水母暴发不但给海洋渔业生产、生态环境、海滨旅游以及海军训练等涉海活动带来巨大的影响，而且还造成频繁的水母蜇伤，对游客、渔民、海军等涉海人员的健康和生命安全构成极大威胁。水母蜇伤轻者皮肤出现皮疹、红肿、瘙痒，令被蜇伤者痛苦不堪，重者昏厥、休克甚至死亡。据报道，全球每年水母蜇伤案例可达1.5亿人次，并造成许多蜇伤蜇伤事件。其中，仅箱水母就至少造成5568例蜇伤致死事件(1954年至今)。我国近年来也出现多次水母蜇伤致死事件，包括青岛、营口、大连、威海等多处沿海地区，其中绝大部分是沙海蜇蜇伤所致，起了社会的关注，水母蜇伤已成为严重的公共健康与安全问题。水母之所以能够给造成人类蜇伤，最根本原因是水母含有毒性剧烈的毒素，它主要存在于水母触手上表面的刺丝囊细胞，是一类蛋白类物质，具有多种不同毒性，如溶血活性、肌肉毒性、肾脏毒性、心脏血管毒性、肝脏毒性和致死毒性等；不但能够造成皮肤、脏器损伤，还可导致被蜇伤者死亡。

但是，到目前为止我国尚无治疗水母蜇伤的专用药物，更无应对重症水母蜇伤的特效急救药。针对水母蜇伤患者，只能对症采取措施，例如：水母蜇伤引起皮炎，则使用抗皮炎药物；肺水肿患者，则进行插管救治等。这些措施虽然可能有一定效果，但是并未从根本上将体内毒素消灭，体内毒素则继续对身体造成破坏，最终造成严重后果。

抗毒血清是目前全世界治疗有毒动物咬伤或蜇伤的最有效的首选急救药物，如抗蛇毒血清等；患者如果可以在第一时间及时注射抗毒血清，其生存的可能性将大大增加，同时为后续抢救和治疗赢得宝贵时间。但是，目前我国尚无沙海蜇毒素抗毒血清，有效的沙海蜇毒素抗毒血清的制备研究也是一片空白；并且，由于水母种类的不同，其毒素组成也存在很大差异，水母毒素抗毒血清具有很强的特异性，一种水母毒素的抗毒血清对其他水母蜇伤的解毒效果并不理想；沙海蜇毒素毒性非常强，如何将其制备成合适的抗原进行动物免疫，既可以产生较好的免疫效果，又不至于毒死动物；此外，沙海蜇毒素成分十分复杂，分子量分布非常广，从数千到数十万道尔顿均有分布，造成并非所有毒素蛋白有具有较好的免疫原性，从而可能无法产生相应抗体，因此选用合适佐剂也至关重要。所以，制备沙海蜇毒素抗毒血清，尤其是效价高、纯度好的抗毒血清工作具有很大难度和挑战。

发明内容

本发明的目的是一种制备沙海蜇毒素抗毒血清的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种沙海蜇毒素抗毒血清的制备方法，对沙海蜇毒素进行减毒处理，减毒处理后沙海蜇毒素的与弗氏佐剂混合进行动物免疫，免疫后采血，制备血清后纯化，即得沙海蜇毒素抗毒血清。

进一步的说，沙海蜇毒素采用甲醛进行减毒，减毒处理后沙海蜇毒素的与弗氏佐剂混合进行动物免疫，期间不断进行效价检测，免疫后采血，离心制备兔血清；然后使用沙海蜇毒素特异偶联的CNBr-activated Agarose 4B亲和层析填料进行亲和层析对血清进行纯化，最终获得纯净沙海蜇毒素特异性抗体。