[发明专利]包含DHA和HMGB1沉默性siRNA的阳离子脂质体及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了包含双氢青蒿素(DHA)和HMGB1沉默性siRNA的阳离子脂质体及其制备方法和用途，由此构建了新型的给药载体。本发明的阳离子脂质体既能实现对多种药物的高载药量、共包裹，又能避免肝首过效应，改善药动学特性。将沉默HMGB1基因的siRNA和DHA构建于同一给药载体中，多靶点作用于TLR4信号轴，对LN治疗起到协同作用，为治疗自身免疫性疾病提供了创造性的研究方法。

【技术领域】

本发明涉及生物技术领域，具体涉及包含DHA和HMGB1沉默性siRNA的阳离子脂质体及其制备方法和用途。

【背景技术】

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是以B淋巴细胞过度活化、大量自身抗体产生为主要免疫学特征的自身免疫性疾病。狼疮患者多为多系统、多器官累及。狼疮性肾炎(lupus nephritis，LN)是SLE的主要并发症和死亡原因。LN的病因和发病机制尚不清楚，但目前公认LN是一种复杂的免疫复合物介导性肾炎。目前临床上尚无有效根治方案，主要用糖皮质激素、免疫抑制剂进行治疗，但副作用大，难以坚持长期给药，病情仍然活动或复发。

因此，探究LN的发病机制、研制高效低毒的狼疮治疗药物已成为医学和药学领域的重要课题。

【发明内容】

本发明通过采用包含DOTAP、DHA和HMGB1沉默性siRNA的阳离子脂质体解决了上述技术问题。

TLR4信号通路过度激活与SLE的活动及LN的发生发展关系密切，研究表明一旦敲除TLR4基因，狼疮鼠的SLE及LN病情明显减轻，TLR4信号通路可成为抗LN药物的有效靶点。青蒿素类药物不仅在抗疟方面有着出色的表现，也具有一定的免疫抑制活性。有研究表明双氢青蒿素(Dihydroartemisinin，DHA)通过抑制TLR4信号通路而改善MRL/lpr鼠的症状，我国在青蒿素及其衍生物治疗红斑狼疮的方面取得了研究突破，但传统青蒿素类抗疟药物的溶解度差、生物利用度低且作用靶点单一等问题限制了该类药物在自身免疫性疾病治疗领域的应用推广。

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1，HMGB1)是一种高度保守的核蛋白。在HMGB1诱导细胞因子产生的过程中，TLR4是HMGB1促炎过程中的必要受体，且是HMGB1参与炎症的主要受体，而NF-κB位于TLR4信号通路的下游，并处于调控免疫反应、细胞增殖和分化枢纽位置，因此HMGB1/TLR4/NF-κB信号轴是免疫调控过程中重要的部分。在本发明中，我们尝试构建基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号轴的多靶点药物递送系统，使用小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)基因沉默技术抑制HMGB1基因，与DHA共同作用于HMGB1/TLR4/NF-κB信号轴，抑制炎症反应。

阳离子脂质体具有良好的生物相容性和靶向性，既能实现对多种药物的高载药量、共包裹，又能避免肝首过效应，改善药动学特性，延长体内的循环时间。可以作为各类治疗药物的传递载体。在此发明中我们采用阳离子脂质体作为递送药物的载体，将沉默HMGB1基因的siRNA和DHA共载于脂质体中。为了进一步提高脂质体的穿膜能力，我们还选择了一种细胞穿膜肽TAT修饰脂质体。使这两类药物作用于TLR4通路上的不同靶点，多靶点作用于TLR4信号轴，对LN治疗起到协同作用。

在一个方面，本发明提供了一种阳离子脂质体，其包含DOTAP、DHA和HMGB1沉默性siRNA。

在一些实施方式中，阳离子脂质体还可以包含TAT肽，优选所述TAT肽具有序列AYGRKKRRQRRR。

在一些实施方式中，阳离子脂质体中DOTAP与HMGB1沉默性siRNA的质量比可以为5∶1至30∶1，优选15∶1。

在一些实施方式中，DHA在所述阳离子脂质体中的最终浓度可以为0.5-20mg/ml，优选1-10mg/ml，更优选1-5mg/ml，最优选1mg/ml。