[发明专利]特异性检测蓝舌病病毒的单抗及其杂交瘤细胞株和应用

说明书

本发明涉及一种杂交瘤细胞株BTV‑2A4及其分泌的单克隆抗体，及该单克隆抗体所识别的BTV‑NS2蛋白B细胞表位多肽，本发明提供的单克隆抗体与且仅与所述BTV‑NS2蛋白B细胞表位多肽特异性结合，经试验验证，与蓝舌病病毒的同属病毒，如中山病毒CHUV、鹿出血热病毒EHDV‑1及EHDV‑6、广西环状病毒GXOV等并不发生反应，因此在检测鉴定蓝舌病病毒感染时可靠程度较高，对疫病防治有较好的指导意义。本发明同时提供一种上述单克隆抗体制备的特异性检测蓝舌病病毒NS2蛋白的C‑ELISA试剂盒，由于使用了本发明的单克隆抗体，高度特异性地识别含有特定B细胞表位的抗原蛋白，因此检测结果可靠准确，操作简单，有利于疫病防治。

技术领域

本发明涉及蓝舌病的基础研究及防治领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株BTV-2A4及其分泌的单克隆抗体，及由上述单克隆抗体所识别的BTV-NS2蛋白B细胞表位多肽；本发明还涉及用于诊断1～24型蓝舌病病毒NS2抗体检测的C-ELISA试剂盒，及所述杂交瘤细胞株、单抗及B细胞表位多肽在蓝舌病病毒检测及预防上的应用。

背景技术

蓝舌病是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的一种虫媒传播的动物疫病。该病毒主要感染牛、羊、鹿等反刍动物。发病特征为：发热、口腔充血及溃疡、舌充血发绀、蹄叉炎症，可造成跛行、新生动物畸形、流产、死亡。蓝舌病被世界动物卫生组织(OfficeInternational Des Epizooties，OIE)划定为动物A类传染病。

自19世纪在非洲发现首例蓝舌病以来，世界多地(南非、中东、美国、加拿大、南美洲、澳大利亚、欧洲、印度等)均有发生并偶有大规模爆发，给畜牧业造成严重经济损失。1979年在云南省师宗县发现国内首例蓝舌病，之后在湖北、安徽、四川、山西等地零星出现牛羊蓝舌病。

目前已知的BTV血清型共有27种，国内出现的血清型包括1、2、4、7、15、16、21等，其中以1型和16型最为常见。随着国际贸易(包括边境动物跨境走私)规模的扩大，国外BTV入境风险也随之增加。因此，对蓝舌病的诊断、预防、治疗的研究刻不容缓。

BTV是呼肠孤病毒科环状病毒属的一种dsRNA病毒。其基因组由10条不同的dsRNA组成，分别编码7种衣壳蛋白(VP1–VP7)及5种非结构蛋白(NS1–NS4以及NS3a)；外围由两层衣壳包裹，通常情况下不含有包膜。BTV的非结构蛋白在不同血清型中具有高度保守性，其中NS2能形成二聚体及多聚体，并能与病毒RNA结合，与病毒的复制及包装密切相关。此外，目前的BTV疫苗以灭活病毒(不含NS2蛋白)为主，被免疫动物的体内不会产生NS2抗体。因此，动物血清是否含有NS2抗体，可作为鉴别被免疫动物是否被野生BTV感染的参考指标，从而对BTV灭活疫苗的效价评估有辅助作用。因此，研发BTV NS2的单克隆抗体，在BTV分子生物学基础研究、阻断NS2功能、鉴定BTV疫苗效价(开发基于NS2mAb的检测血清NS2抗体的ELISA试剂盒)等方面研究及应用具有重要价值。

BTV NS2蛋白是BTV的一种非结构蛋白，是BTV感染宿主细胞时合成的，NS2蛋白主要存在与被感染细胞的细胞核附近，在病毒的复制过程中起重要作用。在BTV流行地区，及时的防控疫病是关键，准确鉴别动物是否被野生BTV感染是指导疫病防治的关键。现有的针对研究BTV NS2抗体的检测技术，存在特异性不够强的缺陷，如中国专利201310478429.7公开了一种蓝舌病病毒NS2蛋白单克隆抗体BTV-4D4及其识别的B细胞表位和应用，为检测蓝舌病疫区动物是否被野生毒株感染提供了一种检测途径，但是在实践中发现，该方法特异性不够强，尤其是与鹿流行性出血热病毒感染容易误判，耽误了疫区防治蓝舌病的时机，而误判的根源在于该专利公开的单克隆抗体BTV-4D4所识别的B细胞表位与EHDV的NS2蛋白相应区段同源性较高。因此，在病毒检测领域，精确找出与且仅与BTV NS2蛋白产生特异性结合的单克隆抗体，才能开发出相应的检测工具，为疫病防治提供依据。

发明内容