[发明专利]一种制首乌的质量检测方法

权利要求书

1.一种制首乌的质量检测方法，包括如下步骤：

（1）制备制首乌的醇溶部位和小分子糖部位；所述制首乌醇溶部位的制备方法为取制首乌粉末加水提取，浓缩提取液，加入无水乙醇至含醇量为50%，离心；上清液加无水乙醇浓缩至含醇量为80%，离心；浓缩上清液，用D101型大孔树脂富集，水洗脱后，以95%乙醇洗脱即得；

所述制首乌小分子糖部位的制备方法为取制首乌粉末加水提取，浓缩提取液，加入无水乙醇，离心；上清液加无水乙醇浓缩，离心；收集沉淀溶解，加无水乙醇浓缩，离心；上清液干燥即得；

（2）建立制首乌的醇溶部位和小分子糖部位的指纹图谱；所述醇溶部位指纹图谱的HPLC色谱条件为采用Agela Venusil MP C18250×4.6mm，5μm色谱柱，流动相由乙腈-0.1%磷酸水组成，流速为1.0mL/min，进样量为10μL，柱温为20℃，检测波长为254nm；检测器为SPD-M20A二极管阵列检测器，梯度洗脱程序如下：

时间min	乙腈%	0.1磷酸水%
0	6	94
6	6	94
10	10	90
15	10	90
25	15	85
45	20	80
70	30	70
75	35	65
85	60	40
90	65	35
100	65	35
105	100	0
110	100	0

所述小分子糖部位指纹图谱的HPLC色谱条件为采用TSK gel GMPWxl300×7.8mm，13μm色谱柱， 0.05M乙酸铵等度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为3μL，柱温为40℃；检测器为Aglient 1260 infinity ELSD;

（3）制首乌醇溶部位和小分子糖部位的益精血药效学研究，所述制首乌醇溶部位和小分子糖部位的益精血药效学研究为检测多批制首乌醇溶部位和小分子糖部位对红细胞数量、红细胞压积、血小板数量和血红蛋白含量的影响;

（4）应用灰色关联分析法确定制首乌指纹图谱中共有峰与其益精血药效的关联度，从而确定制首乌中醇溶部位和小分子糖部位的不同共有峰对其益精血药效的影响；

（5）根据制首乌中醇溶部位和小分子糖部位的不同共有峰对其益精血药效的影响建立质量标准，利用所建立的质量标准直接评价制首乌质量; 所述制首乌中醇溶部位的质量标准为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸水为流动相B，按表1进行梯度洗脱，流速1.0mL/min；检测波长为254nm；

所述制首乌中小分子糖部位的质量标准为以多孔甲基丙烯酸酯构成填充柱；以0.05M乙酸铵等度洗脱，柱温为40℃，流速为0.4mL/min；ELSD检测器参数为：漂移管温度45℃，载气流速为1.2L/min。