[发明专利]在PDCD1基因表达的剪接水平抑制PD-1信号的反义寡核苷酸及其筛选方法与应用

说明书

本发明提供了一种在PDCD1基因表达mRNA前体剪接水平抑制PD‑1信号通路的反义寡核苷酸及其筛选方法与应用。本发明中的反义寡核苷酸能使编码PD‑1蛋白的基因PDCD1在mRNA前体剪接水平发生改变，促进转录产物外显子3发生跳跃，使生成的全长PD‑1蛋白量显著减少、缺乏外显子3的截短蛋白（称作PD‑1Δ3）显著增加。所述反义寡核苷酸可应用于抗癌药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种在PDCD1基因表达的剪接水平抑制PD-1信号的反义寡核苷酸及其筛选方法与应用。

背景技术

癌症已成为人类健康的第一杀手，但治疗癌症的手段和药物仍很有限。当前免疫检查点阻断是一种新的抗癌策略并已取得一定的成效。由PDCD1 基因编码的PD-1(亦称CD279)是免疫检查点通路中的关键分子，PD-1 定位于免疫细胞特别是T细胞的细胞膜上，通过与肿瘤细胞表面的配体分子PD-L1和PD-L2结合产生负调控信号，导致T细胞疲劳以及肿瘤细胞逃逸。阻断PD-1和其配体的结合可解除T细胞疲劳，抑制肿瘤生长。目前已有多个PD-1抗体和PD-L1抗体上市，对霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、小细胞肺癌等在内的多种恶心肿瘤有明显的治疗效果。

PDCD1基因共有5个外显子，编码288氨基酸，氨基端信号肽切除后的成熟蛋白为268个氨基酸。PDCD1基因存在多种可变剪接(alternative splicing)方式，其中外显子3跳跃是PDCD1基因的主要可变剪接方式；缺乏外显子3的PD-1剪接异构体称作PD-1Δ3。外显子3编码整个跨膜序列，缺乏膜定位序列的PD-1Δ3是一种可溶性蛋白，理论上既可以存在于细胞内也可以分泌进入组织液和血液，考虑其含有信号肽序列，PD-1Δ3 很可能是一种分泌性蛋白。现已在人的血清和组织液中发现了可溶性PD-1 (sPD-1)，根据基因表达分析确证其为PD-1Δ3。游离在血液和组织液中的PD-1Δ3保留了与配体结合的能力，可以和PD-1竞争结合PD-L1和 PD-L2等配体，起到天然自身抗体的作用。近期一项临床研究发现非小细胞肺癌患者在厄洛替尼(erlotinib)治疗后的存活期与血清中sPD-1/PD-1Δ3 浓度成正相关。因此，PD-1Δ3不仅仅是丢失了功能，它还能拮抗 PD-L1/PD-1的活性。

在以PD-1/PD-L1为靶点的药物研发领域，各大公司主要方向是抗体药。尽管抗体药已取得一定的效果，但癌症患者的反应率(responder rate) 并不高，药效也有待提高。