[发明专利]血液中辅酶Q10的提取方法和检测方法

说明书

本发明涉及一种血液中辅酶Q10的提取方法和检测方法。该提取方法包括如下步骤：将血液样品进行氧化获得氧化反应的产物；于所述氧化反应的产物中加入第一溶剂溶解，去除不溶物，得第一样品液；挥干所述第一样品液中的溶剂，得固体物；再于所述固体物中加入第二溶剂溶解，去除不溶物，即可。该提取方法能够很好的对血液中的辅酶Q10进行分离提取，所需的血液样品取样量小，提取物中辅酶Q10的含量高，提取物可以采用紫外吸收监测器(包括固定波长和全波长)的液相色谱仪进行有效分离并准确检测其中的辅酶Q10，降低检测成本。

技术领域

本发明涉及生物样品检测，特别是涉及血液中辅酶Q10的提取方法和检测方法。

背景技术

辅酶Q10是脂溶性醌类化合物，是一种脂溶性维生素类似物，其结构与维生素K、维生素E相似。体内辅酶Q10主要来自于自身合成，也可从外源性摄入，如食物(动物内脏、果仁、鱼等)、营养补充剂等。在人体能量消耗多的器官里，辅酶Q10的含量会比较高，如心脏、肝脏、肾脏、肾、脾、胰腺、肾上腺。从细胞层面分析，辅酶Q10的主要生理作用有：1、促进营养物质转化为能量；2、抗氧化。还有改善内皮细胞功能、稳定钙离子通道等。这些都是辅酶Q10维持各种生理功能的基础。当器官中辅酶Q10水平下降时，其功能会受到一定的限制而导致异常。辅酶Q10不足会导致机体疲劳，亚健康状态，甚至诱导疾病的发生或者恶化，如心血管疾病、辅酶Q10缺乏综合征等疾病。监测血浆中辅酶Q10的含量，对维护人体健康，诊断、治疗和预防疾病，具有重要意义。

测定辅酶Q10的常见检测方法有液相色谱-电化学法、液相色谱-紫外法、液相色谱-质谱法。通常样品前处理方法有蛋白沉淀、液液萃取、固相萃取。前处理后辅酶Q10与血液中其它物质由于在色谱柱上的保留性质差异而实现分离；分离后的化合物到达检测器(电化学检测器、紫外检测器、质谱检测器)，信号被记录下来，信号的响应强度与通过检测器的样品的浓度成正比，通过样品信号响应强度的大小与标准品比较来计算待测物辅酶Q10的浓度。

测定辅酶Q10的常见检测方法有高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)、液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)、高效液相色谱-紫外固定波长吸收法(HPLC-UV)、高效液相色谱-紫外全波长吸收法(HPLC-DAD)，其中高效液相色谱也可采用超高效液相色谱(UPLC替代)。上述方法均存在不足之处。其中，HPLC-ECD法在临床上最为常用，灵敏度高，但血浆中脂质物质会钝化电极使其寿命缩短，维护成本增加；LC-MS/MS法灵敏度最好，但仪器和氘代内标物的价格昂贵，导致监测成本高，同时操作要求也高，目前较少用于临床测定血浆总辅酶Q10水平；HPLC-UV法可操作性好，但灵敏度不够，比HPLC-ECD法灵敏度低10倍，而目前的传统的样品前处理方法较难提取得到高浓度的辅酶Q10，检测灵敏度较低。若为保证灵敏度，就需要增加用于检测的血浆样品量，现有技术报道的血浆样品量达150μL-1000μL，同时使用的有机试剂的量也会相对增加，检测成本增加。

发明内容

基于此，有必要提供一种血液中辅酶Q10的提取方法。该提取方法能够很好的对血液中的辅酶Q10进行分离提取，所需的血液样品取样量小，提取物中辅酶Q10的含量高，提取物可以采用紫外吸收监测器(包括固定波长和全波长)的液相色谱仪进行有效分离并准确检测其中的辅酶Q10，降低检测成本。

一种血液中辅酶Q10的提取方法，包括如下步骤：

将血液样品进行氧化获得氧化反应的产物；

于所述氧化反应的产物中加入第一溶剂溶解，去除不溶物，得第一样品液；

挥干所述第一样品液中的溶剂，得固体物；再于所述固体物中加入第二溶剂溶解，去除不溶物，即可；

其中，所述第一溶剂由A溶剂和B溶剂组成；所述A溶剂选自甲醇、乙醇或乙腈，所述B溶剂选自烷烃类溶剂；