[发明专利]一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法

说明书

本发明公开了一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法。所述的方法包括以下步骤：1)外植体选择及消毒；2)茎尖培养；3)丛生芽诱导；4)丛生芽增殖5)生根及移栽。本发明以带有1～2个叶原基、直径1～2mm的茎尖为外植体，能大幅度缩短0.1％升汞消毒时间，最大程度减少重金属对植株的伤害，消毒后茎尖全部成活，生长恢复快，降低由于重金属毒害所造成的变异风险。使用相对较低浓度的细胞分裂素(0.6～1mg/L 6‑BA)进行培养及增殖，获得较高的增殖倍数，并降低增殖过程中的变异概率，提高种苗质量。将生根植株进行移栽，成活率达99％以上。

技术领域

本发明属于植物种苗生产领域，具体涉及一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法。

背景技术

白掌是天南星科白鹤芋属(Spathiphyllum)的一个种，其花、叶具有较高观赏价值，且株型美观、大小适中，耐荫，又具有净化室内空气的功效，适合家庭及办公场所摆放，深受广大消费者的喜爱，市场前景广阔。

白掌通常采用分株方式进行繁育，繁殖系数低、周期长，易携带病毒，大大限制了白掌的规模化和商品化生产。而通过植物组织培养可以在短期内生产出大量优质组培种苗，满足市场需求。

国内关于白掌组培快繁有不少报道，但通常以叶片、叶柄、顶芽、茎段、花梗、花序等组织、器官为外植体，其表面消毒难度均较高，污染率介于10％～87％，且经过多代培养后，易产生内生细菌，影响后续增殖及成苗质量。以叶片、叶柄、茎段、花梗、花序诱导愈伤再分化成苗的途径，容易产生变异。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法。

本发明的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法，包括以下步骤：(1)外植体选择及消毒、(2)茎尖培养、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)生根及移栽。

具体的步骤为：

(1)外植体选择及消毒：于8～10月切取二年生白掌植株，取带4～5片叶柄的茎段，将茎段冲洗、晾干，以含氯消毒溶液进行清洁，用去离子水冲洗干净，无菌条件下剥去部分叶柄，加入HgCl₂溶液进行消毒，再用灭菌去离子水冲洗干净，吸干水分，剥取带有1～2个叶原基、直径为1～2mm的茎尖作为外植体；

(2)茎尖培养：将茎尖置于1/2MS+0.2～0.6mg/L KT+0.1～0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉，pH 5.8～6.0的培养基中培养，获得无菌单芽；培养基配制方法为：将各成分按其含量加入1/2MS培养基中，调pH值，混合均匀，灭菌即得。

(3)丛生芽诱导：将无菌单芽转接到1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉，pH 5.8～6.0的培养基中培养，获得丛生芽；培养基配制方法为：将各成分按其含量加入1/2MS培养基中，调pH值，混合均匀，灭菌即得。

(4)丛生芽增殖：将丛生芽以双芽形式接种于3/4MS+0.6～1mg/L 6-BA+0.05～0.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉粉，pH 5.8～6.0的培养基中进行增殖培养；培养基配制方法为：将各成分按其含量加入3/4MS培养基中，调pH值，混合均匀，灭菌即得。

(5)生根及移栽：从增殖获得的丛生芽中切下带根单株，将带根单株置于1/2MS+0.5～1.0mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉+0.2g/L活性炭，pH 5.8～6.0的培养基中进行生根培养，经炼苗后，移栽于填满泥炭基质的穴盘中进行栽培。培养基配制方法为：将各成分按其含量加入1/2MS培养基中，调pH值，混合均匀，灭菌即得。

所述的1/2MS培养基是将MS培养基中的大量元素减半而得到的培养基，3/4MS是将MS培养基中的大量元素减去1/4，留下3/4，而得到的培养基。