[发明专利]一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法

权利要求书

1.一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体选择及消毒：于8~10月切取二年生美酒白掌植株，取带4~5片叶柄的茎段，将茎段冲洗、晾干，用0.6%含氯消毒溶液振荡清洁40 min，期间换一次清洁液，用去离子水冲洗干净，无菌条件下剥去部分叶柄，加入0.1% HgCl₂溶液进行消毒4~8 min，再用灭菌去离子水冲洗干净，吸干水分，剥取带有1~2个叶原基、直径为1~2 mm的茎尖作为外植体；

（2）茎尖培养：将茎尖置于1/2 MS+0.2~0.6 mg/L KT+0.1 ~0.5mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7.2 g/L卡拉粉，pH 5.8~6.0的培养基中培养，培养条件：先在6 μmol·m^-2·s^-1弱光下培养1周，再转入光照强度为25~30 μmol·m^-2·s^-1，光照时间为10 h/d，温度为24±2℃，空气相对湿度为60 %的条件下培养33天，获得无菌单芽；

（3）丛生芽诱导：将无菌单芽转接到1/2 MS+0.6 mg/L 6-BA+0.02 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7.2 g/L卡拉粉，pH 5.8~6.0的培养基中培养，培养条件：在光照强度为25~30 μmol·m^-2·s^-1，光照时间为10 h/d，温度为24±2℃，空气相对湿度为60 %的条件下培养80天，获得丛生芽；

（4）丛生芽增殖：将丛生芽以双芽形式接种于3/4 MS+0.6~1 mg/L 6-BA+0.05~0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L卡拉粉，pH 5.8~6.0的培养基中进行增殖培养，培养条件：在光照强度为25~30 μmol·m^-2·s^-1，光照时间为10 h/d，温度为24±2℃，空气相对湿度为60 %的条件下培养40天；

（5）生根及移栽：从增殖获得的丛生芽中切下带根单株，将带根单株置于1/2 MS+0.5~1.0 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7.2 g/L卡拉粉+0.2 g/L活性炭，pH 5.8~6.0的培养基中进行生根培养，培养条件：在光照强度为25~30 μmol·m^-2·s^-1，光照时间为10 h/d，温度为24±2℃，空气相对湿度为60 %的条件下培养30天，然后在温度为24~28℃的温室中炼苗1周，移栽于填满泥炭基质的穴盘中，在温度为24~28℃，空气相对湿度为80%的温室中栽培。