[发明专利]用于甾醇发酵生产胆酸的发酵菌的定向改进方法

权利要求书

1.用于甾醇发酵生产胆酸的发酵菌的定向改进方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将甾醇连续倾倒在同一地点的土壤中，持续时间60d以上；

S2、取甾醇倾倒出的土壤；在采取的土壤试样中提取菌悬液；将菌悬液滴入到营养液为甾醇的培养基上培养获得菌落后，挑出单菌落；

S3、将单菌落在营养液为甾醇的新的培养基上培养，并且判断出是否为纯菌株；将纯菌株编号保存；

S4、将纯菌株分别接种到新的甾醇培养基上；同时判断纯菌株是否具有将甾醇发酵生产胆酸的能力；如果有则将该纯菌株保留，如果没有则去除该纯菌株；

S5、将保留的纯菌株接种到新的甾醇培养基上；然后将菌落和培养基底分离，并且在培养基底中提纯胆酸，并且计算胆酸的转化率；

S6、继续将分离出来的菌落接种到新的甾醇培养基上，重复步骤S5，直到甾醇转化为胆酸的转化率大于或者等于90％。

2.根据权利要求1所述的用于甾醇发酵生产胆酸的发酵菌的定向改进方法，其特征在于：在步骤S2中，通过取甾醇倾倒出的土壤；置消毒试管中，加入无菌水以涡旋振荡器振荡摇匀，静置后取上层清液，从而获得菌悬液。

3.根据权利要求1所述的用于甾醇发酵生产胆酸的发酵菌的定向改进方法，其特征在于：在步骤S2中通过以下方法获得菌落，将菌悬液滴入到营养液为甾醇的培养基上，并且放置到恒温培养箱中培养，等到长出菌落后，挑出单菌落。

4.根据权利要求1所述的用于甾醇发酵生产胆酸的发酵菌的定向改进方法，其特征在于：在步骤S4中通过显色法判断纯菌株是否具有将甾醇发酵生产胆酸的能力；

将菌株接种在甾醇培养基中，待长出单菌落后，取菌落下面的培养基放置于试管中，加冰醋酸溶液，超声处理，滤过，取滤液，置试管中，加新制的糠醒溶液与硫酸溶液，在70℃水浴中加热，溶液如呈蓝紫色，则此菌株具备转化能力；若不显蓝紫色，则不具备转化能力。