[发明专利]一种提高辣根过氧化物酶稳定性的固定化酶方法及应用有效
| 申请号： | 201910397760.3 | 申请日： | 2019-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN110218720B | 公开（公告）日： | 2022-07-19 |
| 发明（设计）人： | 赵慧敏;谭冰 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C12N11/14 | 分类号： | C12N11/14;C12N11/02;C12N9/04;C12N9/96;G01N21/31;G01N21/78 |
| 代理公司： | 大连理工大学专利中心 21200 | 代理人： | 温福雪;侯明远 |
| 地址： | 116024*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 辣根过氧化物酶 稳定性 固定 方法 应用 | ||
1.一种提高辣根过氧化物酶稳定性的固定化酶的应用，其特征在于，所述固定化酶的制备步骤如下：
(1)制备氧化石墨烯：石墨烯氧化物采用改进的Hummers化学法制备；
(2)制备沸石咪唑酯骨架-8/石墨烯复合材料固定化辣根过氧化物酶HRP@ZIF-8/GO：GO与Zn(NO3)2在水中充分超声混合，形成混合液A；HRP和2-甲基咪唑溶于水中，形成混合液B；之后，将混合液B快速倒入混合液A中，得到的混合液在室温下搅拌12-24h；其中GO和HRP的质量比为0:50-1:1，HRP质量、Zn(NO3)2的摩尔和2-甲基咪唑的摩尔三者比例为5g:100mol:7000mol；将得到的混合物用高纯水离心清洗3-5次，冷冻干燥12-24h后得到粉末状物质，将其研磨并置于-4～-20℃的条件下冷冻保存；得到的不同GO含量的产物命名为HRP@ZIF-8/GO-x，其中x代表加入的GO在最终产物中的质量百分比；
将所述固定化酶应用于卡那霉素KAN的定量检测：在25-35℃温度条件下，将浓度为0-50μg/L的KAN溶液与KAN适配体溶液置于HEPES缓冲液中孵化20-30min；其中，HEPES缓冲液的浓度为10-25mM，pH＝7-8；随后向混合液中加入HRP@ZIF-8/GO-x复合物在25-35℃下继续孵化20-30min，其中HRP@ZIF-8/GO-x复合物的质量与KAN适配体摩尔量的比值为14×106g:214mol；之后，再加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB和H2O2，其中KAN适配体、TMB和H2O2三者的摩尔比214:50:11；混合物在25-37℃下反应10-30min后，转移到石英比色皿中，记录体系吸光度随吸收波长的变化曲线；
所述的适配体序列为5'-TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3'。
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