[发明专利]一种鉴别北沙参和桔梗的试剂盒及鉴别方法

说明书

本发明涉及中药鉴别技术领域，尤其涉及一种鉴别北沙参和桔梗的试剂盒及鉴别方法。该试剂盒中包括北沙参探针和桔梗探针，探针均连接有荧光标记。上述探针与模板结合的热动力学效能提高，使每个探针均能够更好地和与之对应中药的DNA结合，而不与另外二者的DNA结合，重复性好，假阳性率低，与DNA杂交后即可通过荧光检测进行北沙参和桔梗与其伪品迷果芹的鉴别，操作简便快捷、成本低。

技术领域

本发明涉及中药鉴别技术领域，尤其涉及一种鉴别北沙参和桔梗的试剂盒及鉴别方法。

背景技术

北沙参是一种常用中药，系伞形科植物珊瑚菜的干燥根，具有养阴清肺，祛痰止咳、益胃生津的功效；桔梗是桔梗科植物桔梗的干燥根，具有宣肺祛痰、利咽排脓的功效。由于北沙参、桔梗价格较高，而北沙参、桔梗的外观与迷果芹相似，以致于市场中有人以迷果芹代替北沙参和桔梗进行销售。中药饮片在使用过程中不能随意代替，其伪品严重影响人民用药的安全与疗效。另一方面，药材的实际使用或采购过程中还存在北沙参与桔梗真品无意混淆的情况，给用药带来安全隐患。而当北沙参、桔梗、迷果芹被加工成粉末时，更不易区分。因此，准确鉴别北沙参、桔梗与迷果芹对于中药行业以及人民健康具有重要意义。目前中药常规鉴定方法有基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定等，但对于已被加工的中药则有一定的局限性。

近年来，以DNA条形码为基础的分子鉴定方法快速发展，成为了继传统鉴定方法后的中药鉴定新方法。现有的分子鉴定技术多基于聚合酶链式反应(PCR)及测序技术：PCR获得ITS2序列后，通过对PCR产物进行测序、比对序列信息，从而能够区分正品和伪品。分子鉴定技术可以保证试验数据的可靠性，且重复性高，结果可靠，从分子水平进行鉴定不受样品的状态及采收加工影响。但是由于需要特殊而昂贵的测序仪器对其进行测序(一般需要由测序公司进行)，其经济成本及易用性限制了其推广的可能性。

后又有人利用荧光标记的方式，通过设计特异性引物，在PCR合成过程中于碱基间插入荧光标记以鉴别正品和伪品。该方法从一定程度上改善了原有技术的缺点，但是，全序列标记的荧光标记成本过高，且特异性引物的设计和筛选费时费力，针对不同的待鉴定中药很难获得相应的特异性引物，同样限制了此类技术的推广和应用。

发明内容

针对北沙参与桔梗之间以及二者与迷果芹之间可混淆、粉末状不易区分，以及现有技术中分子鉴定方法成本高、不易设计和筛选特异性引物的技术问题，本发明提供了一种鉴别北沙参和桔梗的试剂盒。

以及，本发明还提供了鉴别北沙参和桔梗的方法。

以及，本发明还提供了上述鉴别北沙参和桔梗的试剂盒在鉴别北沙参与迷果芹，或鉴别桔梗与迷果芹中的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种鉴别北沙参和桔梗的试剂盒，包括北沙参探针和桔梗探针，所述北沙参探针和桔梗探针均连接有荧光标记；其中

所述北沙参探针的序列为5′-CCGTCGTAGGA-3′(如SEQ ID NO.1所示)；

所述桔梗探针的序列为5′-CTGCGAGGCAC-3′(如SEQ ID NO.2所示)。

本试剂盒中的探针序列以北沙参、桔梗与迷果芹的ITS2差异序列中差异较大的序列为基础，经人工设计后得到。与根据差异序列直接得到的探针相比，上述探针与模板DNA结合的热动力学效能提高，使每个探针均能够更好地和与之对应中药的DNA结合，而不与另外二者的DNA结合，重复性好，假阳性率低。将探针与DNA杂交后，即可通过荧光检测进行北沙参和桔梗与其伪品迷果芹的鉴别，包括鉴别其饮片或粉末。本试剂盒利用上述探针可获得准确的鉴别结果，并有效降低了单次反应成本，且不需要特殊检测仪器，大大提升了检测手段的易用性，可在涉及北沙参、桔梗和迷果芹鉴别的科研机构、药房、医院、加工采收厂、中药供应商等地广泛应用。

优选地，所述试剂盒还包括植物ITS2引物，用于扩增北沙参、桔梗和迷果芹的基因组DNA。