[发明专利]组织DNA提取试剂盒

权利要求书

1.一种组织DNA保存、裂解、结合三合一工作液，其特征在于，该工作液包括以下的组分：0.1-0.2 M Tris，20-30mM EDTA，3-5M GuSCN ，1.0-2.0 M NaCl， 0.8-1.5% SDS，1.0-4.0% PVP，pH 8.5-9.5；上述的百分比为质量百分比。

2.根据权利要求1所述的工作液，其特征在于，该工作液包括以下的组分：0.1 M Tris，25mM EDTA，4M GuSCN，1.2 M NaCl，1% SDS，2% PVP，pH 9.0；上述的百分比为质量百分比。

3.一种组织DNA保存管，该保存管含权利要求1或2所述的工作液。

4.一种组织DNA提取试剂盒，该试剂盒包括保存液、裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液和洗脱液，其特征在于，所述的保存液、裂解液、结合液均采用权利要求1或2所述的工作液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的蛋白酶K溶液包括蛋白酶K 17-22mg/ml；所述的洗涤液包括洗涤液I、洗涤液II和洗涤液Ⅳ，洗涤液I含有：3 M GuHCl，10mMTris，50%乙醇，pH 8.0；洗涤液II包括：10mM Tris，80%乙醇；洗涤液Ⅳ包括：85%乙醇；洗脱液含有：10mM Tris，0.1 mM EDTA，pH 9.0。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的工作液中加入0.5-1.0%十二烷基-N-甜菜碱；所述的蛋白酶K溶液包括蛋白酶K 17-22mg/ml；所述的洗涤液含有：3 MGuHCl，10mM Tris，50%乙醇，碳酸氢钠35mM， pH 9.0；洗脱液含有：10mM Tris，0.1 mM EDTA，pH 9.0。

7.权利要求4或5或6所述的试剂盒提取组织DNA的方法。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，该方法采用的权利要求5所述的试剂盒，包括以下的步骤：

1）分别取0.010g-0.050g的新鲜组织于2ml的EP离心管中，分别加入20ul的蛋白酶K溶液，用1ml的枪头适当研磨；

2）加入600ul的工作液，加入钢珠，将EP管置于涡旋震荡仪上高速旋转5min，观察组织是否被打散，若无明显组织块，置于65℃下震荡30min；

3）从2ml EP管中取500ul的工作液加入到1.5mL EP管中，加入10ul的磁珠，充分混匀10分钟；将离心管放到磁力架上1分钟，直到管内的磁珠完全被吸附；用枪头在不接触到磁珠的前提下尽可能地移走全部液体；

4）将离心管从磁力架中取出，加入500ul 洗涤液 I，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀；然后将离心管置于磁力分离架上1分钟，直到管内磁珠完全被吸附；移走全部上清液；

5）加入500ul 洗涤液 II，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀；然后将离心管置于磁力分离架上1分钟，直到管内磁珠完全被吸附；移走全部上清液；

6）加入500ul 洗涤液 III，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀；然后将离心管置于磁力分离架上1分钟，直到管内磁珠完全被吸附；移走全部上清液；室温晾干5-10min；

加入100ul洗脱液，在60℃温度下震荡5分钟；然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，用枪头将上清液移至另一干净离心管中；

7）回收得到的DNA；DNA应保存于-20℃。