[发明专利]一种鉴别当归的试剂盒及鉴别方法

说明书

本发明涉及中药鉴别技术领域，尤其涉及一种鉴别当归的试剂盒及鉴别方法。该试剂盒中包括当归探针，探针连接有荧光标记。上述探针与模板结合的热动力学效能提高，使探针能够更好地与当归结合，而不与独活的DNA结合，重复性好，假阳性率低，与DNA杂交后即可通过荧光检测进行当归和独活的鉴别，操作简便快捷、成本低。

技术领域

本发明涉及中药鉴别技术领域，尤其涉及一种鉴别当归的试剂盒及鉴别方法。

背景技术

当归是伞形科多年生草本植物当归的根，具有补血、活血、调经止痛、润燥滑肠的功效。独活与当归为同科植物，是伞形科植物重齿毛当归的根，具有祛风、除湿、散寒、止痛的功效。由于当归价格逐年呈上涨趋势，而独活与当归外观极为相似，肉眼不易分辨，特别是以饮片及粉末存在时更不易区分，一些商贩便将独活加工后冒充当归进行出售。但二者功效各不相同，若混淆或代替使用，则会贻误治疗。因此准确将当归与独活鉴别开，对于当归市场以及人民健康具有重要意义。目前常规的中药鉴定方法有基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定等，但对于已被加工的中药饮片则有一定的局限性。

近年来，以DNA条形码为基础的分子鉴定方法快速发展，成为了继传统鉴定方法后的中药鉴定新方法。现有的分子鉴定技术多基于聚合酶链式反应(PCR)及测序技术：PCR获得ITS2序列后，通过对PCR产物进行测序、比对序列信息，从而能够区分正品和伪品。分子鉴定技术可以保证试验数据的可靠性，且重复性高，结果可靠，从分子水平进行鉴定不受样品的状态及采收加工影响。但是由于需要特殊而昂贵的测序仪器对其进行测序(一般需要由测序公司进行)，其经济成本及易用性限制了其推广的可能性。

后又有人利用荧光标记的方式，通过设计特异性引物，在PCR合成过程中于碱基间插入荧光标记以鉴别正品和伪品。该方法从一定程度上改善了原有技术的缺点，但是，全序列标记的荧光标记成本过高，且特异性引物的设计和筛选费时费力，针对不同的待鉴定中药很难获得相应的特异性引物，同样限制了此类技术的推广和应用。

发明内容

针对独活与当归饮片及粉末不易区分，以及现有技术中分子鉴定方法成本高、不易设计和筛选特异性引物的技术问题，本发明提供了一种鉴别当归的试剂盒。

以及，本发明还提供了鉴别当归的方法。

以及，本发明还提供了上述鉴别当归的试剂盒在鉴别当归与独活中的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种鉴别当归的试剂盒，包括当归探针，所述当归探针连接有荧光标记；所述当归探针的序列为5′-CGCATCACCTT-3′(如SEQ ID NO.1所示)。

本试剂盒中的探针序列以当归与独活的ITS2差异序列中差异较大的序列为基础，经人工设计后得到。与根据差异序列直接得到的探针相比，上述探针与模板DNA结合的热动力学效能提高，能够更好地和当归DNA结合，而不与独活DNA结合，重复性好，假阳性率低。将探针与DNA杂交后，即可通过荧光检测进行当归与独活的鉴别。本试剂盒利用上述探针可获得准确的鉴别结果，可应用于当归与独活鲜材、饮片、粉末的鉴定，并有效降低了单次反应成本，且不需要特殊检测仪器，大大提升了检测手段的易用性，可在涉及当归与独活鉴别的科研机构、药房、医院、加工采收厂、中药供应商等地广泛应用。

优选地，所述试剂盒还包括植物ITS2引物，用于扩增当归与独活的基因组DNA。

优选地，所述荧光标记连接于所述探针的5′端。一个探针仅连接一个荧光标记，可有效降低荧光基团的使用量，降低成本。

优选地，所述荧光标记为Cy2荧光标记或AlexaFluor488荧光标记。

以及，本发明实施例还提供了一种鉴别当归的方法，用上述鉴别当归的试剂盒对当归进行鉴别。