[发明专利]免疫检测与细胞分析用组合检测卡及联合检测方法

说明书

本发明提供一种免疫检测与细胞分析用组合检测卡及联合检测方法，该组合检测卡通过检测卡底壳配合检测卡上盖形成的壳体结构将免疫检测组件和细胞分析组件集成在一起，壳体上设有分别向免疫检测组件和细胞分析组件加样的第一加样孔和第二加样孔以及透出免疫检测组件的免疫检测区的第一判读窗以及透出细胞分析组件的检测面的第二判读窗和第三判读窗，配合联合检测装置使用，可同时实现免疫检测和细胞分析功能，为POCT层面同步的免疫与细胞现场联检提供了基础条件；该组合检测卡的细胞分析组件通过设置进样缺口、通气孔、一个或者厚度不同的多个测试区，能够避免气泡的产生，实现细胞样品量的精确控制以及同时兼顾细胞计数与分型检测的精密度。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种免疫检测与细胞分析用组合检测卡及联合检测方法。

背景技术

体外诊断是西医询证医学的核心，其通过对患者血液、尿液、唾液等体液样品的检测，来获得患者当时的身体指征，从而为医生的诊断提供客观、明确的量化依据。伴随科技的发展，体外诊断逐渐由临床检验科、中心实验室走向了急诊科和ICU等大型医院临床科室、急救车和巡诊箱等移动医疗载体以及二甲医院和社区医院等多层级诊疗场所，甚至走进了家庭。由此产生了即时检验(Point-Of-Care Test，POCT，也称现场快速检测)的概念，即由非专业人员，在非专业实验室，现场快速的获得检验结果。POCT相关的技术产品，以其专业的性能、灵活的操作，为国家分级诊疗体系的建立提供了重要的支持，同时为针对每个个体即时的健康管理、“治未病”带来了可能。

针对血液、尿液等体液样品，检测靶标主要包括样品基质中特定的疾病相关蛋白以及人体细胞。一般针对特定蛋白检测，主流的技术是基于免疫层析技术的免疫检测，即以抗原抗体的特异性识别为基础，利用硝酸纤维素膜等固相材料的蛋白吸附力作为抗原抗体探针固定的载体，依托硝酸纤维素膜等固相材料的毛细虹吸力作为液体样品涌动与反应的动力，通过抗原抗体上偶联生物标记物的光、电、磁等信号，对抗原抗体特异性识别予以量化的展示；针对人体细胞分析，常用的仪器是流式细胞仪和全自动血液分析仪，就功能而言都是以细胞计数测量(即“计数”)与型别区分(即“分型”)为主。

其中，流式细胞仪的核心原理是利用液流系统的样品管与鞘液管，使鞘液包绕待测样品以圆形流束高速流动，从而将待测细胞单行排列依次通过激光照射区，通过对细胞逐个进行前向散射光、侧向散射光、侧向荧光的分析，最终获得细胞的个数与型别信息。

全自动血液分析仪的计数的主流原理是库尔特原理(称为电阻抗法)，即悬浮在电解液中的细胞随电解液通过小孔管时，取代相同体积的电解液，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生大小和次数与细胞的大小和数目成正比的电位脉冲，从而实现细胞计数。在库尔特法前，采用选择性的溶血剂或化学试剂使其它细胞破碎、特定细胞完整，进而结合库尔特法的计数功能，即可实现分型与计数。

这两种方法都是针对单个细胞进行分析，因而都可以实现细胞精准的计数与分型，然而两种方法都存在仪器昂贵、体积较大、操作专业的问题，不适宜于需要现场或非专门场合下进行细胞分析的情况。

为解决上述问题，在临床检验应用中，现有的细胞分析用检测设备使用一次性的计数片进行取样，该计数片的核心结构是由一定间距的两平行透明薄片及底部包围形成的敞口的测量腔，测量腔中具有厚度进一步减小至～100μm的测量区。测量腔具有如下的几个功能：(1)试剂固定：红细胞溶血剂(季铵盐、皂角苷等)和白细胞颜色染色剂(苏木精、亚甲蓝等)固定在该测量腔内壁上；(2)血液处理：血液样品通过主动吸取的方式进入测量腔，在测量腔内完成红细胞溶血和白细胞染色；(3)细胞铺展：检测区的厚度进一步减小，使得样品中的白细胞尽量在测量区内单层铺展，便于单个细胞分析；(4)检测衔接：检测系统透过测量腔的侧壁可以获得测量区内单层铺展细胞的成像。由此，依赖颜色染色剂实现对细胞的计数以及基于对细胞形态识别的分型。