[发明专利]白血病MEF2D基因断裂探针检测试剂盒

说明书

本发明公开了白血病MEF2D基因断裂探针检测试剂盒。本发明提供了一种用于检测染色体MEF2D基因断裂的荧光原位杂交多克隆分离探针，由定位于染色体MEF2D基因着丝粒侧的两个BAC克隆片段(RP11‑964F7和RP11‑139I14)和定位于染色体MEF2D基因端粒侧的两个BAC克隆片段(RP11‑214H6和RP11‑1047J23)组成。本发明利用FISH技术检测MEF2D基因断裂相关的白血病，对患者进行个体化治疗，本发明探针可以全面检测涉及到MEF2D基因的全部易位，发现新的易位，应用的准确率高、特异性高、成功率高，荧光信号强，操作简便，能辅助优化MEF2D基因断裂相关的白血病的治疗和预后评估。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及白血病MEF2D基因断裂探针检测试剂盒。

背景技术

急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,ALL)是儿童期最常见的恶性肿瘤。基于遗传学异常(基因融合、非整倍体)的分子分型有助于指导临床诊断、危险度分层以及靶向治疗，使B-ALL治愈率得以大幅提高。但是目前仍有约20％的患儿复发，究其原因在于风险分级指标不足、靶向治疗缺乏，发病机制研究不够深入。融合基因是儿童B-ALL发病的重要原因之一，并与ALL风险分级及靶向治疗相关^[1,2]。因此，发现新的融合基因，并阐明其作用机制，对于揭示白血病发生发展机制、以及B-ALL危险度分层和靶向治疗具有重要意义。

儿童B-ALL中大量的染色体重排导致多种融合基因的形成，融合蛋白常发生功能异常。TEL-AML1、E2A-PBX1、BCR-ABL、MLL重排等发生于白血病早期，通过干扰造血发育、激酶通路、染色体重构等信号通路导致白血病发生。融合基因已广泛用于B-ALL的临床危险度分层，例如预后较好的TEL-AML1⁺、E2A-PBX1⁺患儿划为标危，预后差的BCR-ABL1⁺、MLL重排患儿划为高危。另外融合基因是重要的治疗靶点，酪氨酸激酶抑制剂(TKI)靶向治疗BCR-ABL1⁺或费城染色体样(Ph-like)患儿，极大地提高了治愈率^[3]。因此研究者们一直致力于发现新的融合基因。近年来，国内外多个研究组报道了B-ALL中DUX4、MEF2D、ZNF384分别与伴侣基因发生融合^[1,2,4-9]。

Myocyte enhancer factor2D(MEF2D)基因位于染色体1q22，是急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)中新发现的遗传学异常。属于MEF2转录因子家族，具有结合和增强转录调控因子MCM1的结构域，主要功能是对细胞分化进行调节。急性白血病中染色体重排可导致MEF2D基因的异常高表达，从而促使白血病的形成和发展。伴有MEF2D基因重排的患者预后较差，可联合靶向药物治疗以提高疗效。累及MEF2D基因重排的对手基因有多个，目前已发现的有如下7个：B-cell CLL/lymphoma 9(BCL9,1q21),heterogeneous nuclear ribonucleoprotein U-like 1(HNRNPUL1,19q13.2),deleted in azoospermia-associated protein 1(DAZAP1,19p13.3),colonystimulating factor 1receptor(CSF1R,5q32),synovial sarcoma translocation,chromosome 18(SS18,18q11.2),signal transducer and activator of transcription6(STAT6,12q13.3),and Forkhead Box J2(FOXJ2,12p13.31)，常规PCR方法无法全部覆盖^[10]。

MEF2D基因重排分别占儿童和青少年B-ALL患者的4.1％和6.5％，在年轻成人和成年人中的发生率分别为2.7％和1.8％。