[发明专利]猝灭荧光RNA标志物合成方法及应用于食源性致病菌检测的方法有效
| 申请号： | 201910375397.5 | 申请日： | 2019-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110241182B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 陈全胜;李欢欢;刘蕊;吕鹏;欧阳琴;焦天慧;朱家骥;郭志明 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6823 | 分类号： | C12Q1/6823;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212013 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 rna 标志 合成 方法 应用于 食源性 致病菌 检测 | ||
1.一种非用于疾病诊断与治疗的食源性致病菌的上转换纳米荧光超灵敏检测方法，其特征在于，运用核酸酶Cas13a对痕量致病菌细胞中的特定核酸靶标进行精确切割，并利用核酸酶Cas13a的附带切割效应，剪切猝灭荧光RNA标志物，释放可被检测的荧光；借助上转换荧光光谱系统采集荧光光谱数据，获取上转换荧光纳米材料最大吸收峰的荧光强度值，构建荧光强度变化值与不同量食源性致病菌核酸靶标的定量检测模型，实现食源性致病菌核酸的纳米荧光痕量检测；
合成所述猝灭荧光RNA标志物的方法为：采用一步溶剂热法合成带有氨基修饰的上转换纳米颗粒，将特定的RNA与猝灭剂结合合成RNA荧光标志物，采用戊二醛交联法将RNA荧光标志物与带有氨基修饰的上转换纳米颗粒连接在一起得到猝灭荧光RNA标志物；在检测过程中，所述猝灭荧光RNA标志物与待测食源性致病菌的RNA特异性结合，核酸酶Cas13a对特定核酸靶标RNA进行特异性切割，激活的Cas13a具有附带切割活性，对猝灭荧光RNA标志物进行切割，释放可被检测的荧光；
所述上转换纳米颗粒粒径大小50-100nm，通过添加NH4F的量来调节粒径大小；
所述上转换纳米颗粒荧光颜色通过调节稀土元素掺杂比例来控；
所述上转换荧光纳米颗粒为NaGdF4:Yb/Er、NaGdF4:Yb/Tm或NaGdF4:Yb/Ho；
所述猝灭剂采用BHQ系列荧光猝灭剂。
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